| 查看: 1378 | 回复: 5 | ||
pushizi木虫 (小有名气)
pushizi
|
[求助]
示踪色素覆盖在蛋白条带上-western blot结果很难看-求解决
|
|
最近在进行一个约为14 kD大小蛋白的western blot实验，很郁闷的是：电泳出来后，我的蛋白条带就在loading buffer的指示剂（考马斯亮蓝（G250））的蓝色部分区域，将其转到硝酸纤维素膜后，蓝色的染料也能转到膜上，显色完条带就跟蓝色的交杂在一起，非常难看。思考以下解决方案，请大家多提建议，哪条可行： （1）换用胶的浓度：现在用的是15%的胶。是否应该换用20%的胶浓度？看一些帖子里好像指示剂的快慢在不同的胶浓度中不同。20%的胶中指示剂的大小在哪里？有没有虫友做过啊？另外，14kD的蛋白是不是用20%的胶浓度有点夸张啊？ （2）将示踪剂换为溴酚蓝？看一些帖子中有人说溴酚蓝能跑在7 kD的蛋白以下，又有人说在17kD左右，有否确定的说法啊？请注下胶浓度~~ （3）能否不加指示剂啊？仅用甘油沉淀蛋白，然后用预染marker进行指示？这个过程有人做过么？会有问题么？另外，甘油的终浓度采用多少比较好啊？ 最后，再请教大家一个问题，在做western blot的过程中，条带总是溢出，我不确定每个样品（全细胞裂解液）中我的目的蛋白有多少，那么我除了反复试验，减少上样量之外，有没有其他什么快速简便的方法来解决？ 感谢从头看到尾的朋友们！更加感谢能够为我解答的各位好心人！在此先谢过！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有169人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
yimingwang
金虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 566.5
- 红花: 6
- 帖子: 142
- 在线: 32.9小时
- 虫号: 1192378
- 注册: 2011-01-19
- 性别: GG
- 专业: 植物保护生物技术
2楼2013-08-10 00:25:48
pushizi
木虫 (小有名气)
pushizi
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 5675.3
- 散金: 120
- 帖子: 218
- 在线: 63.6小时
- 虫号: 816313
- 注册: 2009-07-26
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2013-08-10 10:00:27
yimingwang
金虫 (小有名气)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 566.5
- 红花: 6
- 帖子: 142
- 在线: 32.9小时
- 虫号: 1192378
- 注册: 2011-01-19
- 性别: GG
- 专业: 植物保护生物技术
4楼2013-08-13 03:46:55
pushizi
木虫 (小有名气)
pushizi
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 5675.3
- 散金: 120
- 帖子: 218
- 在线: 63.6小时
- 虫号: 816313
- 注册: 2009-07-26
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
5楼2013-08-13 13:28:03
6楼2013-08-13 17:47:05