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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)

[求助] 请教大豆种子蛋白提取方法用于western blot

大家好,我现在想做大豆种子中一个蛋白的western blot分析,需要提大豆种子蛋白。用于不同研究的大豆种子蛋白提取方法不同。包括:1.用于双向电泳的提取方法,先用TCA-丙酮获得丙酮粉,再用蛋白裂解液(尿素,去污剂,两性电解质及蛋白酶抑制剂)获得大豆蛋白。2.用PBS缓冲液提取大豆蛋白。3.另外也有人用Tric-Hcl和CaCl2来提大豆蛋白。
请教诸位大侠,我该选用哪种提取方法来获得大豆种子蛋白用western?如果还有别的方法,请赐教。
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
,谢谢
2楼2012-10-12 08:07:00
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lanziliuli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
尚轩舞雪: 金币+2 2012-10-16 14:36:55
建议用双向的方法不错
做好科研
3楼2012-10-16 11:22:17
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lanziliuli at 2012-10-16 11:22:17
建议用双向的方法不错

双向的方法有几个试剂较贵,成本有点高,我只做单向电泳是不是有点浪费了
4楼2012-10-16 14:36:35
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xhjggl

木虫 (正式写手)

可以用BSP004
5楼2012-10-16 22:37:28
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by xhjggl at 2012-10-16 22:37:28
可以用BSP004

我用Tris, SDS, 尿素,加巯基乙醇,提出的蛋白跑电泳分离效果很好,但是western杂交时条带很浅,有的样品杂不出带来。因为梳子的大小有限,我想问要增大蛋白的浓度应该怎么做?
6楼2012-10-29 14:47:48
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