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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教大豆种子蛋白提取方法用于western blot
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)

[求助] 请教大豆种子蛋白提取方法用于western blot

大家好，我现在想做大豆种子中一个蛋白的western blot分析，需要提大豆种子蛋白。用于不同研究的大豆种子蛋白提取方法不同。包括：1.用于双向电泳的提取方法，先用TCA－丙酮获得丙酮粉，再用蛋白裂解液（尿素，去污剂，两性电解质及蛋白酶抑制剂）获得大豆蛋白。2.用PBS缓冲液提取大豆蛋白。3.另外也有人用Tric-Hcl和CaCl2来提大豆蛋白。
请教诸位大侠，我该选用哪种提取方法来获得大豆种子蛋白用western?如果还有别的方法，请赐教。
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尚轩舞雪

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1楼2012-10-11 10:49:34
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
，谢谢
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2楼2012-10-12 08:07:00
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lanziliuli

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
尚轩舞雪: 金币+2 2012-10-16 14:36:55
建议用双向的方法不错
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做好科研
3楼2012-10-16 11:22:17
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lanziliuli at 2012-10-16 11:22:17
建议用双向的方法不错

双向的方法有几个试剂较贵，成本有点高，我只做单向电泳是不是有点浪费了
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4楼2012-10-16 14:36:35
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xhjggl

木虫 (正式写手)
可以用BSP004
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5楼2012-10-16 22:37:28
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尚轩舞雪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xhjggl at 2012-10-16 22:37:28
可以用BSP004

我用Tris, SDS, 尿素，加巯基乙醇，提出的蛋白跑电泳分离效果很好，但是western杂交时条带很浅，有的样品杂不出带来。因为梳子的大小有限，我想问要增大蛋白的浓度应该怎么做？
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6楼2012-10-29 14:47:48
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