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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问谁做western blot有关VEGFR2蛋白表达定量的？
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widersky

新虫 (小有名气)

[求助] 请问谁做western blot有关VEGFR2蛋白表达定量的？ 已有2人参与

我网上查的VEGFR2蛋白分子量是210KDa，或者180-190k，但是我做出来单一条带是在85k那块，不知道是怎么回事？这是我想要的VEGFR2么？
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1楼 2014-02-20 13:48:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

啊保333

铜虫 (著名写手)
5%脱脂牛奶或BSA都可以的
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6楼2014-02-24 18:50:27
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
widersky: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-02-24 18:20:27
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 18:25:09
我做过KDR的western蛋白条带，因为分子量很大，不好出来结果，基本在靠近浓缩胶的地方。你可以尝试着延长电泳时间和转膜时间。
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2楼2014-02-20 15:03:14
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widersky

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daibingling at 2014-02-20 15:03:14
我做过KDR的western蛋白条带，因为分子量很大，不好出来结果，基本在靠近浓缩胶的地方。你可以尝试着延长电泳时间和转膜时间。

您好~我电泳分离时间100分钟，而且用的230kda以下的预染蛋白marker观察，跑完后看到230kda离分离胶有一段距离，不是很接近。湿转260mA，横流转膜时间刚开始试过2.5h，发现转过了，滤纸上都印有marker明显的颜色，然后降到了2h，滤纸上还是有淡淡的marker颜色，这次尝试是1.5h，不知道效果怎么样。我总共做过4次，第一次啥也没出来，第二次出来单一条带在85kda，后来都是出连续多条带……下面的照片是我上次的片，这种多条带的怎么避免啊，我这次准备降低一下一抗浓度。不好意思，问题有点多~
请问谁做western blot有关VEGFR2蛋白表达定量的？
DSC09978.JPG
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3楼2014-02-20 15:50:21
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啊保333

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 18:25:16
不知道你的一抗是哪个公司的呢，看说明书吧，我做过的VEGFR2（CST）分子量是210、230，100v 电泳分离时间100分钟，湿转250mA，横流转膜2h，还好了。
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4楼2014-02-22 14:37:04
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widersky

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 啊保333 at 2014-02-22 14:37:04
不知道你的一抗是哪个公司的呢，看说明书吧，我做过的VEGFR2（CST）分子量是210、230，100v 电泳分离时间100分钟，湿转250mA，横流转膜2h，还好了。

咱俩的电泳和转膜条件几乎一样，我买的R＆D的，说明书上除了写应用与WB的推荐浓度外，别的几乎没什么。。。那你是用5%脱脂牛奶配的一抗二抗还有封闭么？
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5楼2014-02-24 18:20:08
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cherishjy

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 啊保333 at 2014-02-22 14:37:04
不知道你的一抗是哪个公司的呢，看说明书吧，我做过的VEGFR2（CST）分子量是210、230，100v 电泳分离时间100分钟，湿转250mA，横流转膜2h，还好了。

请问你杂VEGFR2的时候转膜buffer里面甲醇含量是多少？
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7楼2015-02-06 12:22:33
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啊保333

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cherishjy at 2015-02-06 12:22:33
请问你杂VEGFR2的时候转膜buffer里面甲醇含量是多少？...

20%
8楼2015-02-06 23:23:32
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cherishjy

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 啊保333 at 2015-02-06 23:23:32
20%...

请问你煮过蛋白样吗？我最近也在做这个蛋白，总是做不出来，换了你的条件100v跑120min，200mA转了2.5h，咨询过CST的技术她们让我把甲醇浓度降到5%，我也做了可还是做出来了，有同学跟我说这个是膜蛋白不能煮的
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9楼2015-02-10 18:45:17
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only123abc

银虫 (小有名气)
请问楼主现在问题解决了么？我现在也在纠结VEGFR2，老是做不出。而且有的文献VEGFR2是两个条带，有的是一个，是怎么回事呢？
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10楼2015-09-28 13:53:27
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