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widersky

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[求助] 请问谁做western blot有关VEGFR2蛋白表达定量的？已有2人参与

我网上查的VEGFR2蛋白分子量是210KDa，或者180-190k，但是我做出来单一条带是在85k那块，不知道是怎么回事？这是我想要的VEGFR2么？

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1楼 2014-02-20 13:48:48

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啊保333

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6楼2014-02-24 18:50:27

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daibingling

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 18:25:09

我做过KDR的western蛋白条带，因为分子量很大，不好出来结果，基本在靠近浓缩胶的地方。你可以尝试着延长电泳时间和转膜时间。

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2楼2014-02-20 15:03:14

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widersky

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2楼: Originally posted by daibingling at 2014-02-20 15:03:14
我做过KDR的western蛋白条带，因为分子量很大，不好出来结果，基本在靠近浓缩胶的地方。你可以尝试着延长电泳时间和转膜时间。

您好~我电泳分离时间100分钟，而且用的230kda以下的预染蛋白marker观察，跑完后看到230kda离分离胶有一段距离，不是很接近。湿转260mA，横流转膜时间刚开始试过2.5h，发现转过了，滤纸上都印有marker明显的颜色，然后降到了2h，滤纸上还是有淡淡的marker颜色，这次尝试是1.5h，不知道效果怎么样。我总共做过4次，第一次啥也没出来，第二次出来单一条带在85kda，后来都是出连续多条带……下面的照片是我上次的片，这种多条带的怎么避免啊，我这次准备降低一下一抗浓度。不好意思，问题有点多~