应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问谁做western blot有关VEGFR2蛋白表达定量的？
131/2返回列表12下一页
查看: 4618  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

widersky

新虫 (小有名气)

[求助] 请问谁做western blot有关VEGFR2蛋白表达定量的？ 已有2人参与

我网上查的VEGFR2蛋白分子量是210KDa，或者180-190k，但是我做出来单一条带是在85k那块，不知道是怎么回事？这是我想要的VEGFR2么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2014-02-20 13:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

啊保333

铜虫 (著名写手)
5%脱脂牛奶或BSA都可以的
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-02-24 18:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
widersky: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-02-24 18:20:27
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 18:25:09
我做过KDR的western蛋白条带，因为分子量很大，不好出来结果，基本在靠近浓缩胶的地方。你可以尝试着延长电泳时间和转膜时间。
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-20 15:03:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

widersky

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by daibingling at 2014-02-20 15:03:14
我做过KDR的western蛋白条带，因为分子量很大，不好出来结果，基本在靠近浓缩胶的地方。你可以尝试着延长电泳时间和转膜时间。

您好~我电泳分离时间100分钟，而且用的230kda以下的预染蛋白marker观察，跑完后看到230kda离分离胶有一段距离，不是很接近。湿转260mA，横流转膜时间刚开始试过2.5h，发现转过了，滤纸上都印有marker明显的颜色，然后降到了2h，滤纸上还是有淡淡的marker颜色，这次尝试是1.5h，不知道效果怎么样。我总共做过4次，第一次啥也没出来，第二次出来单一条带在85kda，后来都是出连续多条带……下面的照片是我上次的片，这种多条带的怎么避免啊，我这次准备降低一下一抗浓度。不好意思，问题有点多~
请问谁做western blot有关VEGFR2蛋白表达定量的？
DSC09978.JPG
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-20 15:50:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

啊保333

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 18:25:16
不知道你的一抗是哪个公司的呢，看说明书吧，我做过的VEGFR2（CST）分子量是210、230，100v 电泳分离时间100分钟，湿转250mA，横流转膜2h，还好了。
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-22 14:37:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

widersky

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 啊保333 at 2014-02-22 14:37:04
不知道你的一抗是哪个公司的呢，看说明书吧，我做过的VEGFR2（CST）分子量是210、230，100v 电泳分离时间100分钟，湿转250mA，横流转膜2h，还好了。

咱俩的电泳和转膜条件几乎一样，我买的R＆D的，说明书上除了写应用与WB的推荐浓度外，别的几乎没什么。。。那你是用5%脱脂牛奶配的一抗二抗还有封闭么？
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-24 18:20:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cherishjy

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 啊保333 at 2014-02-22 14:37:04
不知道你的一抗是哪个公司的呢，看说明书吧，我做过的VEGFR2（CST）分子量是210、230，100v 电泳分离时间100分钟，湿转250mA，横流转膜2h，还好了。

请问你杂VEGFR2的时候转膜buffer里面甲醇含量是多少？
赞一下 回复此楼
7楼2015-02-06 12:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

啊保333

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cherishjy at 2015-02-06 12:22:33
请问你杂VEGFR2的时候转膜buffer里面甲醇含量是多少？...

20%
8楼2015-02-06 23:23:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cherishjy

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 啊保333 at 2015-02-06 23:23:32
20%...

请问你煮过蛋白样吗？我最近也在做这个蛋白，总是做不出来，换了你的条件100v跑120min，200mA转了2.5h，咨询过CST的技术她们让我把甲醇浓度降到5%，我也做了可还是做出来了，有同学跟我说这个是膜蛋白不能煮的
赞一下 回复此楼
9楼2015-02-10 18:45:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

only123abc

银虫 (小有名气)
请问楼主现在问题解决了么？我现在也在纠结VEGFR2，老是做不出。而且有的文献VEGFR2是两个条带，有的是一个，是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-28 13:53:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 widersky 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭