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qincaiyan615

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 2300660
注册: 2013-02-26
专业: 动物遗传学

[求助] 请教各位，怎么才能知道western曝光的条带是否是我要的蛋白呢？已有5人参与

请教各位，我在做western，我的目的蛋白是10kd，但曝光的条带与Marker比是58kd左右，也没背景，也没其他的带，条带还比较漂亮，我怎么才能知道这条带是否是我要的蛋白呢？

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1楼 2014-11-10 00:01:57

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sun_in_night

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
qincaiyan615(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-25 13:16:14

做一个阴性对照，一个不应该有你的目的蛋白的对照，这样你就能知道那条带到底是非特异的条带还是真的你的条带。理论上来说蛋白大小不会差那么多，哪怕是有修饰，有蛋白聚合（变性了，理论上应该没有）。

8楼2014-11-11 04:03:42

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wutianyu1208

铜虫 (正式写手)

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性别: GG
专业: 发育生物学

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:21:01

那肯定不是啊。你配的多大的胶，跑的时候是什么多少伏，转模是什么条件啊？不说清楚没法分析

[ 发自小木虫客户端 ]

2楼2014-11-10 08:01:42

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西昆仑

银虫 (小有名气)

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:29

如果你一抗二抗没有加错且没有其他条带的话，按理说应该就是了，但你目的条带的位置和显出来的差别太大了。。。建议重新看一下你的目的条带的分子量以及marker的条带说明。

欢迎同行交流

3楼2014-11-10 09:44:44

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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

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在线: 98.5小时
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注册: 2014-11-01
性别: GG
专业: 人类遗传学
管辖: 分子生物

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-10 15:20:42

58kd是其他蛋白比较多的区段，楼主需谨慎。跟你的目的size差太多，很可能不是。
10kd很小，多load一些样品试试，再多加点一抗，注意别跑过了。。
祝好运啊

Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner

4楼2014-11-10 11:00:45

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