| 查看: 4465 | 回复: 11 | |||
[求助]
连接克隆载体提取质粒结果跑出两条带 已有6人参与
|
|
最近在做质粒的构建，将目地片段连接到pmd-18t中。连了很多次，每次16度连接过夜，后转化到感受态细胞中，挑菌过夜后进行菌液pcr，每次都有很多杂带出现，目的条带也不是很亮。于是提质粒鉴定，提出的质粒是两条带，一条带大小是我的目的条带，一条带大小是我的载体条带。好几次都是这种结果。不知道是什么原因？ 1：为什么提取质粒的条带与双酶切的跑胶结果是一样的呢？这说明我是连接上了还是没连接上啊？ 2：如果没有连接上，连接的是空载体，不是应该只有空载体的一个带吗？大小在2600bp处。为什么还会有我的目的条带呢？ 3：如果连接上了，提的质粒应该不能把载体和片段断开吧？ 实在是不知道怎么回事？请高手帮帮忙分析一下。十万火急 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有173人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR片段连接载体，转化不出阳性克隆，求解?
已经有14人回复
- PET28a重组质粒酶切后有三条？
已经有10人回复
- 质粒提取，结果出现四条、五条带，请大神指教！
已经有25人回复
- 重组质粒，摇菌提取质粒后，如何测序？
已经有5人回复
- 求助 提取质粒跑胶没带
已经有3人回复
- 如何获取目的质粒？
已经有8人回复
- 将目的基因连入表达质粒，酶切位点问题
已经有3人回复
- 连接转化假阳性提不出来质粒吗？
已经有8人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- 目的基因连接表达载体的质粒PCR验证，结果出现2条带
已经有10人回复
- PCR后，质粒模板消失了，到底是什么原因啊？有没有遇到同样问题的同学啊？？
已经有4人回复
- 质粒快抽有条带，提取时却没有了，什么问题啊？
已经有15人回复
- 目的基因连接到克隆载体后提取质粒测序，序列有问题
已经有11人回复
- 质粒提取有白色沉淀，跑胶却没条带，啥原因？
已经有24人回复
- 感受态细胞提取的质粒酶解后为什么带型不一样？
已经有12人回复
- 质粒提取后出现两条亮度相同的带，谁帮我看一下。。。。。。。
已经有6人回复
- 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
已经有18人回复
- 我将1质粒连在BK载体上，但是阳性克隆鉴定一直是阴性，什么原因呢
已经有6人回复
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 【求助/交流】质粒电泳
已经有12人回复
- 【求助/交流】质粒电泳中的三条带
已经有14人回复
2楼2014-11-03 16:27:47
3楼2014-11-03 17:20:19
4楼2014-11-03 21:29:42
dongdekun
新虫 (初入文坛)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 83.1
- 帖子: 30
- 在线: 10.2小时
- 虫号: 2935774
- 注册: 2014-01-16
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
5楼2014-11-03 23:29:05
6楼2014-11-04 09:02:00
7楼2014-11-04 19:12:53
8楼2014-11-05 08:44:28
dongdekun
新虫 (初入文坛)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 83.1
- 帖子: 30
- 在线: 10.2小时
- 虫号: 2935774
- 注册: 2014-01-16
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
9楼2014-11-05 08:55:30
10楼2014-11-05 16:01:18
