应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 连接克隆载体提取质粒结果跑出两条带
51/1返回列表
查看: 4428  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 连接克隆载体提取质粒结果跑出两条带 已有6人参与

最近在做质粒的构建，将目地片段连接到pmd-18t中。连了很多次，每次16度连接过夜，后转化到感受态细胞中，挑菌过夜后进行菌液pcr，每次都有很多杂带出现，目的条带也不是很亮。于是提质粒鉴定，提出的质粒是两条带，一条带大小是我的目的条带，一条带大小是我的载体条带。好几次都是这种结果。不知道是什么原因？
1：为什么提取质粒的条带与双酶切的跑胶结果是一样的呢？这说明我是连接上了还是没连接上啊？
2：如果没有连接上，连接的是空载体，不是应该只有空载体的一个带吗？大小在2600bp处。为什么还会有我的目的条带呢？
3：如果连接上了，提的质粒应该不能把载体和片段断开吧？
实在是不知道怎么回事？请高手帮帮忙分析一下。十万火急
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-03 15:22:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jian212 at 2014-11-03 16:27:47
请上传图片看看，以便更好的分析结果。。
顺便说下，质粒跑电泳是有2条带的。

图片没保存呀，因为感觉不对。但是我分别用的目的片段的对照和载体的对照，结果显示两条带分别是我的目的片段和载体带。。正常来说我跑出来的质粒大小应该是我的目的片段和载体的片段和呀？
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-03 17:20:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-03 18:04:02
请上传图片看看，以便更好的分析结果。。
顺便说下，质粒跑电泳是有2条带的。
赞一下 回复此楼
学习再学习，努力再努力。
2楼2014-11-03 16:27:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:26:53
质粒超螺旋跑的很前面，有可能巧合出现在你的目的基因位置。排除这个原因，做个单酶切

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-03 21:29:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:27:01
1）正常提取的质粒跑电泳是好几条带的，直接电泳，跟Marker比大小是没有参考性的。
2）如果想看质粒大小（一般没必要），可以单酶切再跑电泳。
3）质粒鉴定一般结合：菌落（液）PCR + 质粒双酶切 + 测序。。。
祝好运。
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-03 23:29:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工求调剂 +4 为学666 2026-03-16 4/200 2026-03-17 14:28 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工 +4 安全上岸！ 2026-03-16 4/200 2026-03-17 14:02 by 勇敢太监王公公
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +4 梨花珞晚风 2026-03-17 4/200 2026-03-17 13:38 by houyaoxu
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +15 不知道叫什么！ 2026-03-15 17/850 2026-03-17 10:13 by Sammy2
[考研] 301求调剂 +3 A_JiXing 2026-03-16 3/150 2026-03-17 08:21 by 无际的草原
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭