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95846713

新虫 (初入文坛)

[求助] 带有酶切位点胶回收产物可以与表达载体pet28a直接连接吗?已有5人参与

引物设计了酶切位点EcorI和BamH I,本想连接pMD18-T在双酶切,但导师告诉我可以用回收产物直接连接pet28a,pet28a我已经用EcorI和BamH I双酶切了露出了粘性末端,我不知道胶回收产物是否也用EcorI和BamH I双酶切露出粘性末端后再与双酶切后的pet28a连接?还是胶回收产物不用双酶切直接与双酶切后的pet28a连接呢? 求解答,既然可以这样连接,那连接pMD-18T的目的是什么呢?
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lpzl

木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
95846713(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-29 08:49:46
直接连吧。。。PCR产物双酶切后,与同样酶切后的pET28a载体直接连接吧,我一直都是这么干的。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-10-29 08:27:47
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95846713

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-10-29 08:27:47
直接连吧。。。PCR产物双酶切后,与同样酶切后的pET28a载体直接连接吧,我一直都是这么干的。。。

谢谢
3楼2014-10-29 15:43:21
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hjyxm

木虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
95846713(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:19:46
pMD-18T是克隆载体,可以让你的目的片段复制得更多,从而更容易与表达载体相连;理论上来说,目的片段的胶回收产物可以和表达载体直接连接。
好好工作!
4楼2014-10-29 16:01:06
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happydove

新虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
95846713(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:19:57
目的片段胶回收后 再双酶切 然后再回收  最后和酶切好的载体连接
5楼2014-10-29 17:06:55
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95846713

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by happydove at 2014-10-29 17:06:55
目的片段胶回收后 再双酶切 然后再回收  最后和酶切好的载体连接

谢谢
6楼2014-10-29 17:09:11
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-10-29 08:27:47
直接连吧。。。PCR产物双酶切后,与同样酶切后的pET28a载体直接连接吧,我一直都是这么干的。。。

pcr产物还要双酶切吗
踏实
7楼2014-11-05 11:34:09
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lpzl

木虫 (正式写手)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-07 11:39:44
引用回帖:
7楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-05 11:34:09
pcr产物还要双酶切吗...

那是肯定的,PCR产物和载体都用两种相同的酶切,再连接。。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
8楼2014-11-05 15:20:25
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korchagin

木虫 (小有名气)

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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-07 11:39:47
如果你要直接切的话,设计任务时应该加入保护基团,否则酶切效率会降低
9楼2014-11-05 15:27:36
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