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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 带有酶切位点胶回收产物可以与表达载体pet28a直接连接吗？
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95846713

新虫 (初入文坛)

[求助] 带有酶切位点胶回收产物可以与表达载体pet28a直接连接吗？ 已有5人参与

引物设计了酶切位点EcorI和BamH I，本想连接pMD18-T在双酶切，但导师告诉我可以用回收产物直接连接pet28a，pet28a我已经用EcorI和BamH I双酶切了露出了粘性末端,我不知道胶回收产物是否也用EcorI和BamH I双酶切露出粘性末端后再与双酶切后的pet28a连接？还是胶回收产物不用双酶切直接与双酶切后的pet28a连接呢？ 求解答，既然可以这样连接，那连接pMD-18T的目的是什么呢？
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1楼 2014-10-28 22:12:57
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
95846713(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-29 08:49:46
直接连吧。。。PCR产物双酶切后，与同样酶切后的pET28a载体直接连接吧，我一直都是这么干的。。。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-10-29 08:27:47
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95846713

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-10-29 08:27:47
直接连吧。。。PCR产物双酶切后，与同样酶切后的pET28a载体直接连接吧，我一直都是这么干的。。。

谢谢
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3楼2014-10-29 15:43:21
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hjyxm

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
95846713(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:19:46
pMD-18T是克隆载体，可以让你的目的片段复制得更多，从而更容易与表达载体相连；理论上来说，目的片段的胶回收产物可以和表达载体直接连接。
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好好工作！
4楼2014-10-29 16:01:06
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
95846713(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:19:57
目的片段胶回收后 再双酶切 然后再回收  最后和酶切好的载体连接
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5楼2014-10-29 17:06:55
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95846713

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by happydove at 2014-10-29 17:06:55
目的片段胶回收后 再双酶切 然后再回收  最后和酶切好的载体连接

谢谢
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6楼2014-10-29 17:09:11
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-10-29 08:27:47
直接连吧。。。PCR产物双酶切后，与同样酶切后的pET28a载体直接连接吧，我一直都是这么干的。。。

pcr产物还要双酶切吗
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踏实
7楼2014-11-05 11:34:09
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lpzl

木虫 (正式写手)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-07 11:39:44
引用回帖:
7楼: Originally posted by hajierlove at 2014-11-05 11:34:09
pcr产物还要双酶切吗...

那是肯定的，PCR产物和载体都用两种相同的酶切，再连接。。。。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
8楼2014-11-05 15:20:25
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korchagin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-07 11:39:47
如果你要直接切的话，设计任务时应该加入保护基团，否则酶切效率会降低
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9楼2014-11-05 15:27:36
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