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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家酶切载体的时候回收完了用不用碱性磷酸酶处理啊？
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大家酶切载体的时候回收完了用不用碱性磷酸酶处理啊？ 已有6人参与

如题，讨论交流一下：因为好多载体酶切一次是可以用好多次的，大家酶切载体的时候回收完了用之前用不用碱性磷酸酶处理啊？我一般不用的，除非平端或单酶切。
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我们对於那份面向未来的勇气，过於渴求而被过去所迷惑
1楼 2011-01-12 20:56:23
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
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amisking(金币+1):鼓励交流。 2011-01-12 21:10:55
我都处理的，呵呵。反正也花不了几十分钟，防止双酶切不彻底的那部分单酶切产物自连。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-01-12 21:05:13
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-12 21:05:13:
我都处理的，呵呵。反正也花不了几十分钟，防止双酶切不彻底的那部分单酶切产物自连。

之前不用处理是因为一是觉得麻烦，二是做连接也很少出现假阳性，但是最近做克隆有点不顺啊，谢谢交流
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我们对於那份面向未来的勇气，过於渴求而被过去所迷惑
3楼2011-01-12 21:07:53
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
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双酶切从来不去磷酸化，太麻烦了。。。只有单酶切的时候去磷酸化
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2011-01-15 21:40:02
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
避免两端都是平末端、避免单酶切，就避免用CIAP
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5楼2011-01-15 22:51:48
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怎么都行

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
只有单酶切的时候怕载体自连才会去磷酸化处理
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6楼2011-01-15 23:15:23
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)
★
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一般单酶切或平末端需要处理，双酶切理论上不用处理。但我一般两个酶分开切，这样保险一点。
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7楼2011-01-15 23:20:51
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