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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » 碱性磷酸酶的检测
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694974171

金虫 (小有名气)

[求助] 碱性磷酸酶的检测

碱性磷酸酶（ALP）的检测有三种方法：1 Gomori钙钴法  2  偶氮偶联法  3  碱性磷酸酶染色试剂盒法。 请问一下试剂盒那个公司的比较好。另外我看到有些人直接用PNPP检测法：底物显色液以0.05M ，pH9.6的碳酸盐缓冲液溶解对硝基苯磷酸酯，1mg/ml，使用前现配；37℃显色1h，5M KOH终止反应，405nm处酶标仪检测。这种方法是不是不用试剂盒，直接买硝基苯磷酸酯就可以了？
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694974171

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1楼 2011-10-08 11:28:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

rainbows1

禁虫 (著名写手)
★
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-10-10 11:06:29
694974171(金币+5): 2011-10-10 14:37:06
本帖内容被屏蔽
4楼2011-10-09 12:49:45
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rainbows1

禁虫 (著名写手)
★
694974171(金币+5): 2011-10-11 15:36:47
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-10-12 00:07:53
本帖内容被屏蔽
7楼2011-10-11 10:57:13
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普通回帖

humourhy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
694974171(金币+5): 2011-10-09 09:09:25
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-10-10 11:06:20
不知道楼主是需要定量检测还是定性检测呢？
我们实验室检测ALP都是利用的固蓝染色法进行定性检测表征的，利用到了Fast Blue RR, Naphthol AS-MX Phosphate Alkaline Solution和Citrate Concentrated Solution，这些试剂都是在Sigma买的
不知对您是否有所帮助
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2楼2011-10-08 16:04:09
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694974171

金虫 (小有名气)
我是做定量的，想用试剂盒，但是不知那家公司的合适，我看有些试剂盒步骤非常麻烦，还得在20秒内测。另外我看到有些人直接用PNPP检测法，这好像是定性，不能定量吧
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3楼2011-10-09 09:11:18
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694974171

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-10-09 12:49:45:
PNPP法是世界通用的ALP定量方法，很简单，买个PNPP粉末，其他就是一个缓冲溶液，显色后分光光度计读数就好了。

请问PNPP法可以定量是吗？最后结果用什么表示呢？活力单位还是直接分光光度计的读数OD值？用酶标仪可以测吗？
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5楼2011-10-10 14:38:46
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694974171

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by humourhy at 2011-10-08 16:04:09:
不知道楼主是需要定量检测还是定性检测呢？
我们实验室检测ALP都是利用的固蓝染色法进行定性检测表征的，利用到了Fast Blue RR, Naphthol AS-MX Phosphate Alkaline Solution和Citrate Concentrated Solution，这 ...

我是做定量的，想用试剂盒，但是不知那家公司的合适，我看有些试剂盒步骤非常麻烦，还得在20秒内测。另外我看到有些人直接用PNPP检测法，这好像是定性，不能定量吧
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6楼2011-10-10 14:39:00
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694974171

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-10-11 10:57:13:
可以定量呀，贴个protocol给你吧，我们实验室一直用这个方法。可以用OD值表示，如果要活力单位，要做标样。


反应液配制：0.5 M Tris，10 mM p-nitrophenyl phosphate，2 mM MgCl2，1 mM ZnCl2 ，pH 9.0
培 ...

450nm?不是405nm么？做标样的话是不是要买碱性磷酸酶？
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8楼2011-10-11 15:36:27
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rainbows1

禁虫 (著名写手)
★
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-10-12 00:07:41
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694974171
9楼2011-10-11 19:43:53
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694974171

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
9楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-10-11 19:43:53:
哦，好像是405，因为我们的酶标仪最小只有450。应该要酶的标样，我没买，只是用了相对值。

非常感谢啊！这个OD值可以直接写在文章里吗？我看别人的文献都写的试剂盒，数值是活性单位
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10楼2011-10-12 08:36:53
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