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694974171

金虫 (小有名气)

[求助] 碱性磷酸酶的检测

碱性磷酸酶(ALP)的检测有三种方法:1 Gomori钙钴法  2  偶氮偶联法  3  碱性磷酸酶染色试剂盒法。 请问一下试剂盒那个公司的比较好。另外我看到有些人直接用PNPP检测法:底物显色液以0.05M ,pH9.6的碳酸盐缓冲液溶解对硝基苯磷酸酯,1mg/ml,使用前现配;37℃显色1h,5M KOH终止反应,405nm处酶标仪检测。这种方法是不是不用试剂盒,直接买硝基苯磷酸酯就可以了?
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694974171

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-10-11 10:57:13:
可以定量呀,贴个protocol给你吧,我们实验室一直用这个方法。可以用OD值表示,如果要活力单位,要做标样。


反应液配制:0.5 M Tris,10 mM p-nitrophenyl phosphate,2 mM MgCl2,1 mM ZnCl2 ,pH 9.0
培 ...

450nm?不是405nm么?做标样的话是不是要买碱性磷酸酶?
8楼2011-10-11 15:36:27
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humourhy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


694974171(金币+5): 2011-10-09 09:09:25
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-10-10 11:06:20
不知道楼主是需要定量检测还是定性检测呢?
我们实验室检测ALP都是利用的固蓝染色法进行定性检测表征的,利用到了Fast Blue RR, Naphthol AS-MX Phosphate Alkaline Solution和Citrate Concentrated Solution,这些试剂都是在Sigma买的
不知对您是否有所帮助
2楼2011-10-08 16:04:09
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694974171

金虫 (小有名气)

我是做定量的,想用试剂盒,但是不知那家公司的合适,我看有些试剂盒步骤非常麻烦,还得在20秒内测。另外我看到有些人直接用PNPP检测法,这好像是定性,不能定量吧
3楼2011-10-09 09:11:18
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rainbows1

禁虫 (著名写手)


lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-10-10 11:06:29
694974171(金币+5): 2011-10-10 14:37:06
本帖内容被屏蔽

4楼2011-10-09 12:49:45
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