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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » 【求助】关于细胞试验
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herbal

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于细胞试验已有3人参与

请教大家 ：
关于细胞毒性、黏附、增殖、分化试验，这几个之间有什么区别和联系呢？都采用什么方法做？时间点怎么设计？要注意什么问题？
谢谢！
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1楼2010-09-27 10:21:35
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travelerchem

至尊木虫 (知名作家)
★
americanyk(金币+1):Thank you 2010-09-27 10:01:43
herbal(金币+1): 2010-09-27 20:21:48
黏附 一般是24小时以内
增殖 可以选择 1、3、5、7天
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2楼2010-09-27 10:46:44
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sendysan

铁杆木虫 (著名写手)
★
herbal(金币+1): 2010-09-27 20:21:55
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论！ 2010-09-30 23:58:04
细胞毒性、 增殖   用mtt做
黏附 可以看看荧光，clsm
分化试验 用alp做（成骨放向）
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3楼2010-09-27 18:29:56
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herbal

金虫 (正式写手)
不太清楚时间点的选择是否有什么根据呢?
引用回帖:
Originally posted by travelerchem at 2010-09-27 10:46:44:
黏附 一般是24小时以内
增殖 可以选择 1、3、5、7天

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4楼2010-09-27 20:23:05
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柳中袁

铁杆木虫 (小有名气)

无敌虫
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-13 08:48:56
引用回帖:
Originally posted by herbal at 2010-09-27 20:23:05:
不太清楚时间点的选择是否有什么根据呢?

可以针对你选用的细胞，来找相关文献，然后设定时间梯度周期。

毒性试验也是一样，选择材料浓度梯度也要参照之前相关文献。
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5楼2011-05-12 18:31:37
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Stalight

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-13 08:49:02
请注意:毒性与增殖是相似的方法，不同的手段，至少，其初始细胞数设定是不同的哈！毒性初始细胞数较大，增殖较小。黏附可以合并增殖，在增殖的初期做。分化请结合你用的细胞系，选择特定方法或特征蛋白。

最后，反对一说这些实验就用MTT，其实MTT法是很老旧与不准的方法，建议多考虑下准确度更高的方法，比如CCK8，H3等等。
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这人很懒...
6楼2011-05-12 20:18:19
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-14 06:41:28
细胞毒性：狭义的毒性实验和增值实验相差不多，很多文章都是通用的。但广义的细胞毒性试验就有差别了。就说一下狭义的吧，毒性试验也就是增值实验，采用的方法一般有MTT,Alamar Blue还有检测总的cDNA含量，这些方法都可以做。建议你看一篇文章，题目是“Analytical methods to assess nanoparticle toxicity”，是一篇综述，很不错。里面很系统的讲过增值或者说毒性实验的各种方法的优缺点。

黏附：黏附实验主要是检测细胞对材料的喜好程度，如果是做那种陶瓷片或者涂层的致密材料一般都是做24h的，检测方法有SEM和荧光染色，这两种方法我个人觉得没太大差别，但荧光图一般都比较漂亮能给自己的文章加分。如果是做多孔支架材料的话，可以选择多做几个时间点。有文章做了1,3,7天这三个点，看的细胞在支架内部的生长情况。看别人做的结果，还是有区别的。

增殖：同上。

分化：这块就要看你是做什么材料了。我主要是做骨修复材料，所以一般都是检测成骨化的表征。这方面能做的东西非常多。拿我做的方向来说明问题吧，MSC早期分化的表征一般都是选择ALP(碱性磷酸酶)，可以做的检测有ALP染色，也有通过pNPP方法来定量检测材料对细胞的分化的影响。中晚期分化的表征可以检测Osteocalcin(OC), Osteopontin(OP), BSP, ALP, Runx2这些都是成骨标志基因，检测方法也很多有RT-PCR，Real time RT-PCR还有荧光定量PCR，这些方法都可以用于检测。可以根据自己的需要来做
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7楼2011-05-13 18:57:22
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-14 06:41:35
这几个检测都是反映材料对细胞的影响，因为不同的实验对材料的要求不同，有的是要求材料能杀死细胞，有的则是要求能促进细胞增殖，而且最好能诱导其向所需要求的方向进行分化。
时间点的设计则需要看你是做哪方面的的了，MTT一般是做1,3,5,7这三个点。Alamar Blue有每12h检测一次，连续检测4d的。
细胞实验首先要知道接种细胞的数量，因为不同的检测方法以及检测指标对细胞的接种数量有不同要求，而且这个接种数量和细胞的类型有很大关系，像hBMSC和rBMSC大小相差较大，所以接种数量有时候相差一个数量级
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8楼2011-05-13 19:02:31
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herbal

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 诺曼底1227 at 2011-05-13 19:02:31:
这几个检测都是反映材料对细胞的影响，因为不同的实验对材料的要求不同，有的是要求材料能杀死细胞，有的则是要求能促进细胞增殖，而且最好能诱导其向所需要求的方向进行分化。
时间点的设计则需要看你是做哪方面 ...

挺详细的，谢谢咯
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9楼2011-05-16 21:29:56
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-17 21:50:42
引用回帖:
Originally posted by herbal at 2011-05-16 21:29:56:
挺详细的，谢谢咯

客气，主要是之前一直在做这方面的工作，所以看了一下相关的文献
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10楼2011-05-16 22:02:08
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