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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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herbal

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于细胞试验 已有3人参与

请教大家 :
关于细胞毒性、黏附、增殖、分化试验,这几个之间有什么区别和联系呢?都采用什么方法做?时间点怎么设计?要注意什么问题?
谢谢!
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travelerchem

至尊木虫 (知名作家)


americanyk(金币+1):Thank you 2010-09-27 10:01:43
herbal(金币+1): 2010-09-27 20:21:48
黏附 一般是24小时以内
增殖 可以选择 1、3、5、7天
2楼2010-09-27 10:46:44
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sendysan

铁杆木虫 (著名写手)


herbal(金币+1): 2010-09-27 20:21:55
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论! 2010-09-30 23:58:04
细胞毒性、 增殖   用mtt做
黏附 可以看看荧光,clsm
分化试验 用alp做(成骨放向)
3楼2010-09-27 18:29:56
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herbal

金虫 (正式写手)

不太清楚时间点的选择是否有什么根据呢?
引用回帖:
Originally posted by travelerchem at 2010-09-27 10:46:44:
黏附 一般是24小时以内
增殖 可以选择 1、3、5、7天

4楼2010-09-27 20:23:05
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柳中袁

铁杆木虫 (小有名气)

无敌虫

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-13 08:48:56
引用回帖:
Originally posted by herbal at 2010-09-27 20:23:05:
不太清楚时间点的选择是否有什么根据呢?

可以针对你选用的细胞,来找相关文献,然后设定时间梯度周期。

毒性试验也是一样,选择材料浓度梯度也要参照之前相关文献。
5楼2011-05-12 18:31:37
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Stalight

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-13 08:49:02
请注意:毒性与增殖是相似的方法,不同的手段,至少,其初始细胞数设定是不同的哈!毒性初始细胞数较大,增殖较小。黏附可以合并增殖,在增殖的初期做。分化请结合你用的细胞系,选择特定方法或特征蛋白。

最后,反对一说这些实验就用MTT,其实MTT法是很老旧与不准的方法,建议多考虑下准确度更高的方法,比如CCK8,H3等等。
这人很懒...
6楼2011-05-12 20:18:19
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-14 06:41:28
细胞毒性:狭义的毒性实验和增值实验相差不多,很多文章都是通用的。但广义的细胞毒性试验就有差别了。就说一下狭义的吧,毒性试验也就是增值实验,采用的方法一般有MTT,Alamar Blue还有检测总的cDNA含量,这些方法都可以做。建议你看一篇文章,题目是“Analytical methods to assess nanoparticle toxicity”,是一篇综述,很不错。里面很系统的讲过增值或者说毒性实验的各种方法的优缺点。

黏附:黏附实验主要是检测细胞对材料的喜好程度,如果是做那种陶瓷片或者涂层的致密材料一般都是做24h的,检测方法有SEM和荧光染色,这两种方法我个人觉得没太大差别,但荧光图一般都比较漂亮能给自己的文章加分。如果是做多孔支架材料的话,可以选择多做几个时间点。有文章做了1,3,7天这三个点,看的细胞在支架内部的生长情况。看别人做的结果,还是有区别的。

增殖:同上。

分化:这块就要看你是做什么材料了。我主要是做骨修复材料,所以一般都是检测成骨化的表征。这方面能做的东西非常多。拿我做的方向来说明问题吧,MSC早期分化的表征一般都是选择ALP(碱性磷酸酶),可以做的检测有ALP染色,也有通过pNPP方法来定量检测材料对细胞的分化的影响。中晚期分化的表征可以检测Osteocalcin(OC), Osteopontin(OP), BSP, ALP, Runx2这些都是成骨标志基因,检测方法也很多有RT-PCR,Real time RT-PCR还有荧光定量PCR,这些方法都可以用于检测。可以根据自己的需要来做
7楼2011-05-13 18:57:22
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-14 06:41:35
这几个检测都是反映材料对细胞的影响,因为不同的实验对材料的要求不同,有的是要求材料能杀死细胞,有的则是要求能促进细胞增殖,而且最好能诱导其向所需要求的方向进行分化。
时间点的设计则需要看你是做哪方面的的了,MTT一般是做1,3,5,7这三个点。Alamar Blue有每12h检测一次,连续检测4d的。
细胞实验首先要知道接种细胞的数量,因为不同的检测方法以及检测指标对细胞的接种数量有不同要求,而且这个接种数量和细胞的类型有很大关系,像hBMSC和rBMSC大小相差较大,所以接种数量有时候相差一个数量级
8楼2011-05-13 19:02:31
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herbal

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 诺曼底1227 at 2011-05-13 19:02:31:
这几个检测都是反映材料对细胞的影响,因为不同的实验对材料的要求不同,有的是要求材料能杀死细胞,有的则是要求能促进细胞增殖,而且最好能诱导其向所需要求的方向进行分化。
时间点的设计则需要看你是做哪方面 ...

挺详细的,谢谢咯
9楼2011-05-16 21:29:56
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-05-17 21:50:42
引用回帖:
Originally posted by herbal at 2011-05-16 21:29:56:
挺详细的,谢谢咯

客气,主要是之前一直在做这方面的工作,所以看了一下相关的文献
10楼2011-05-16 22:02:08
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