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herbal金虫 (正式写手)
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【求助】关于细胞试验 已有3人参与
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请教大家 ： 关于细胞毒性、黏附、增殖、分化试验，这几个之间有什么区别和联系呢？都采用什么方法做？时间点怎么设计？要注意什么问题？ 谢谢！ |
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travelerchem
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细胞毒性：狭义的毒性实验和增值实验相差不多，很多文章都是通用的。但广义的细胞毒性试验就有差别了。就说一下狭义的吧，毒性试验也就是增值实验，采用的方法一般有MTT,Alamar Blue还有检测总的cDNA含量，这些方法都可以做。建议你看一篇文章，题目是“Analytical methods to assess nanoparticle toxicity”，是一篇综述，很不错。里面很系统的讲过增值或者说毒性实验的各种方法的优缺点。 黏附：黏附实验主要是检测细胞对材料的喜好程度，如果是做那种陶瓷片或者涂层的致密材料一般都是做24h的，检测方法有SEM和荧光染色，这两种方法我个人觉得没太大差别，但荧光图一般都比较漂亮能给自己的文章加分。如果是做多孔支架材料的话，可以选择多做几个时间点。有文章做了1,3,7天这三个点，看的细胞在支架内部的生长情况。看别人做的结果，还是有区别的。 增殖：同上。 分化：这块就要看你是做什么材料了。我主要是做骨修复材料，所以一般都是检测成骨化的表征。这方面能做的东西非常多。拿我做的方向来说明问题吧，MSC早期分化的表征一般都是选择ALP(碱性磷酸酶)，可以做的检测有ALP染色，也有通过pNPP方法来定量检测材料对细胞的分化的影响。中晚期分化的表征可以检测Osteocalcin(OC), Osteopontin(OP), BSP, ALP, Runx2这些都是成骨标志基因，检测方法也很多有RT-PCR，Real time RT-PCR还有荧光定量PCR，这些方法都可以用于检测。可以根据自己的需要来做 |
7楼2011-05-13 18:57:22
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这几个检测都是反映材料对细胞的影响，因为不同的实验对材料的要求不同，有的是要求材料能杀死细胞，有的则是要求能促进细胞增殖，而且最好能诱导其向所需要求的方向进行分化。 时间点的设计则需要看你是做哪方面的的了，MTT一般是做1,3,5,7这三个点。Alamar Blue有每12h检测一次，连续检测4d的。 细胞实验首先要知道接种细胞的数量，因为不同的检测方法以及检测指标对细胞的接种数量有不同要求，而且这个接种数量和细胞的类型有很大关系，像hBMSC和rBMSC大小相差较大，所以接种数量有时候相差一个数量级 |
8楼2011-05-13 19:02:31
herbal
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9楼2011-05-16 21:29:56
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10楼2011-05-16 22:02:08
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