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zhjzhou

木虫 (著名写手)

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[求助] 大家一般用PET28a做蛋白表达的时候用哪几个酶酶切

第一次用PET28a这个载体，想请教用过的各位，目的基因连接到这个载体一般用的是哪两个酶做的酶切啊？我看论坛里有的说是NCO I 开始翻译，用这个的比较多，我这边的师兄用过的说要用BamH I 和X ho I之间的这些酶做酶切，本人正在烦恼用什么酶做酶切才不影响目的蛋白的表达呢，知道的请告之，谢谢！

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1楼2012-05-02 10:26:53

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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我们Nco I 用得最多，原因是用这个酶切位点引入的无关序列最少（N端最多多两个氨基酸），如果要保留N端的his-tag就用NdeI位点；后面的酶切位点用XhoI较多。
其实用哪个酶切位点最主要的还是要看你的目的基因内部没有哪些酶切位点，要不要保留载体上面的his-tag等，还有一个就是尽量不要选择靠得很近的两个酶切位点，怕酶切是由于空间位阻效应切不开。