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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pet28和pet21表达的蛋白对于蛋白结晶的区别
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liyaohui1990

木虫 (小有名气)

[求助] pet28和pet21表达的蛋白对于蛋白结晶的区别 已有3人参与

各位虫友，有谁做过蛋白结晶吗？我正在考虑是用pET28还是pET21作为我的表达载体来表达我的目的蛋白。pET28表达我的目的蛋白的话会附带上两个His标签，可能导致我的蛋白过大，而pET21表达出来的目的蛋白酶活性没有pET28的高。我正在考虑用哪个载体表达更好？各位虫友给点建议啊!感激不尽！
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1楼 2014-06-06 10:20:40
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-06 15:28:37
好好看看图谱就知道了“
http://wenku.baidu.com/link?url= ... UW92jx2V0E8DtOxCg0S


http://wenku.baidu.com/link?url= ... lxuAusI1z_vLAYhwBu7
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-06 15:17:48
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younghe

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引入一个3C或者TEV酶切位点到28a的his后面，就可以把标签切除了
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3楼2014-06-06 16:19:11
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liyaohui1990

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-06 15:17:48
好好看看图谱就知道了“
http://wenku.baidu.com/link?url=Dp3jmdNN_yhLb_f0wk0Dc9vQy0GTLLOMuym1FVEs7xrF38K_JHTAe4n0Gp3UKJ3EuhJ8jk9amA0j-UfrMvsjk5_GUW92jx2V0E8DtOxCg0S


http://wenku.baidu.com/link?ur ...

能稍微解释一下吗？比如我是不是要用凝血酶切除前面的肽段啊?但是我的目的蛋白酶本身不是很稳定，我怕这样一折腾，我的酶会丧失比较多的酶活性。
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4楼2014-06-07 14:11:05
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liyaohui1990

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by younghe at 2014-06-06 16:19:11
引入一个3C或者TEV酶切位点到28a的his后面，就可以把标签切除了

您好，请问这个怎么引入呢？能稍微具体点吗？
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5楼2014-06-07 14:11:41
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younghe

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liyaohui1990 at 2014-06-07 14:11:41
您好，请问这个怎么引入呢？能稍微具体点吗？...

额，改造载体啊，加一段蛋白序列就可以了啊，玩蛋白晶体的应该很熟悉的
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6楼2014-06-07 22:41:54
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liyaohui1990(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-08 16:34:59
用28a，切除一个HIS标签就好了呀，，没必要带两个标签。
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7楼2014-06-08 13:13:06
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liyaohui1990

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by viki_MDK at 2014-06-08 13:13:06
用28a，切除一个HIS标签就好了呀，，没必要带两个标签。

我在构建的时候没有加终止密码子，那我现在怎么切除一个His标签呢？
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8楼2014-06-08 20:59:25
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liyaohui1990

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by younghe at 2014-06-07 22:41:54
额，改造载体啊，加一段蛋白序列就可以了啊，玩蛋白晶体的应该很熟悉的...

不是很明白啊。我才开始接触蛋白结晶，文献还没看几篇，很菜鸟的，麻烦您指教。比如加什么样的蛋白序列呢？
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9楼2014-06-08 21:00:33
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