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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pet28和pet21表达的蛋白对于蛋白结晶的区别
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liyaohui1990

木虫 (小有名气)

[求助] pet28和pet21表达的蛋白对于蛋白结晶的区别 已有3人参与

各位虫友，有谁做过蛋白结晶吗？我正在考虑是用pET28还是pET21作为我的表达载体来表达我的目的蛋白。pET28表达我的目的蛋白的话会附带上两个His标签，可能导致我的蛋白过大，而pET21表达出来的目的蛋白酶活性没有pET28的高。我正在考虑用哪个载体表达更好？各位虫友给点建议啊!感激不尽！
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1楼 2014-06-06 10:20:40
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younghe

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liyaohui1990 at 2014-06-07 14:11:41
您好，请问这个怎么引入呢？能稍微具体点吗？...

额，改造载体啊，加一段蛋白序列就可以了啊，玩蛋白晶体的应该很熟悉的
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6楼2014-06-07 22:41:54
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查看全部 9 个回答

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-06 15:28:37
好好看看图谱就知道了“
http://wenku.baidu.com/link?url= ... UW92jx2V0E8DtOxCg0S


http://wenku.baidu.com/link?url= ... lxuAusI1z_vLAYhwBu7
赞一下 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-06 15:17:48
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younghe

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引入一个3C或者TEV酶切位点到28a的his后面，就可以把标签切除了
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3楼2014-06-06 16:19:11
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liyaohui1990

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-06 15:17:48
好好看看图谱就知道了“
http://wenku.baidu.com/link?url=Dp3jmdNN_yhLb_f0wk0Dc9vQy0GTLLOMuym1FVEs7xrF38K_JHTAe4n0Gp3UKJ3EuhJ8jk9amA0j-UfrMvsjk5_GUW92jx2V0E8DtOxCg0S


http://wenku.baidu.com/link?ur ...

能稍微解释一下吗？比如我是不是要用凝血酶切除前面的肽段啊?但是我的目的蛋白酶本身不是很稳定，我怕这样一折腾，我的酶会丧失比较多的酶活性。
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4楼2014-06-07 14:11:05
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