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汕头大学海洋科学接受调剂
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liyaohui1990

木虫 (小有名气)

[求助] pet28和pet21表达的蛋白对于蛋白结晶的区别 已有3人参与

各位虫友,有谁做过蛋白结晶吗?我正在考虑是用pET28还是pET21作为我的表达载体来表达我的目的蛋白。pET28表达我的目的蛋白的话会附带上两个His标签,可能导致我的蛋白过大,而pET21表达出来的目的蛋白酶活性没有pET28的高。我正在考虑用哪个载体表达更好?各位虫友给点建议啊!感激不尽!
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younghe

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liyaohui1990 at 2014-06-07 14:11:41
您好,请问这个怎么引入呢?能稍微具体点吗?...

额,改造载体啊,加一段蛋白序列就可以了啊,玩蛋白晶体的应该很熟悉的
6楼2014-06-07 22:41:54
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查看全部 9 个回答

飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-06 15:28:37
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-06 15:17:48
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younghe

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引入一个3C或者TEV酶切位点到28a的his后面,就可以把标签切除了
3楼2014-06-06 16:19:11
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liyaohui1990

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-06 15:17:48
好好看看图谱就知道了“
http://wenku.baidu.com/link?url=Dp3jmdNN_yhLb_f0wk0Dc9vQy0GTLLOMuym1FVEs7xrF38K_JHTAe4n0Gp3UKJ3EuhJ8jk9amA0j-UfrMvsjk5_GUW92jx2V0E8DtOxCg0S


http://wenku.baidu.com/link?ur ...

能稍微解释一下吗?比如我是不是要用凝血酶切除前面的肽段啊?但是我的目的蛋白酶本身不是很稳定,我怕这样一折腾,我的酶会丧失比较多的酶活性。
4楼2014-06-07 14:11:05
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