| 查看: 4591 | 回复: 5 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
zhjzhou木虫 (著名写手)
|
[求助]
大家一般用PET28a做蛋白表达的时候用哪几个酶酶切
|
||
第一次用PET28a这个载体，想请教用过的各位，目的基因连接到这个载体一般用的是哪两个酶做的酶切啊？我看论坛里有的说是NCO I 开始翻译，用这个的比较多，我这边的师兄用过的说要用BamH I 和X ho I之间的这些酶做 酶切，本人正在烦恼用什么酶做酶切才不影响目的蛋白的表达呢，知道的请告之，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有171人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- pet28和pet21表达的蛋白对于蛋白结晶的区别
已经有8人回复
- pET-28a与pGEX-4T-1表达蛋白的区别
已经有10人回复
- PET28a重组质粒酶切后有三条？
已经有10人回复
- 载体酶切位点与目的片段重复
已经有13人回复
- PET-28a载体怎么解读
已经有7人回复
- 酶切位点的选择对蛋白表达有影响吗
已经有6人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- pET28a双酶切后连接目的基因，什么也不长。。。
已经有23人回复
- 请教各位大家，做蛋白表达的怎么发影响因子高的文章！
已经有14人回复
- 重组蛋白含半胱氨酸纯化过程如何保护巯基
已经有14人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- 用过pET28a(+)表达载体的高人请指教
已经有31人回复
- 【求助/交流】大家酶切载体的时候回收完了用不用碱性磷酸酶处理啊？
已经有6人回复
- 【求助】做NAMD的1K4C.pdb时候出现的错误
已经有30人回复
- 【求助/交流】关于PEt-28a质粒载体表达蛋白质的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】（引物设计）怎么防止pET28a中Nco1的ATG影响目的基因的表达？
已经有9人回复
- 【求助/交流】pET-28a的酶切位点
已经有6人回复
- 【讨论】请问海投的时候，CV里要附带推荐信？
已经有7人回复
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhjzhou: 金币+2, ★有帮助, 谢谢！ 2012-05-02 17:37:30
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-02 18:47:02
感谢参与，应助指数 +1
zhjzhou: 金币+2, ★有帮助, 谢谢！ 2012-05-02 17:37:30
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-02 18:47:02
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2012-05-02 14:42:42
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 专家考核, 辛苦 2012-05-02 13:42:47
zhjzhou: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-05-02 17:35:53
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 专家考核, 辛苦 2012-05-02 13:42:47
zhjzhou: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-05-02 17:35:53
|
我们Nco I 用得最多，原因是用这个酶切位点引入的无关序列最少（N端最多多两个氨基酸），如果要保留N端的his-tag就用NdeI位点；后面的酶切位点用XhoI较多。 其实用哪个酶切位点最主要的还是要看你的目的基因内部没有哪些酶切位点，要不要保留载体上面的his-tag等，还有一个就是尽量不要选择靠得很近的两个酶切位点，怕酶切是由于空间位阻效应切不开。 |
2楼2012-05-02 13:24:13
liangxiuyan
木虫 (职业作家)
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 1873.5
- 帖子: 3304
- 在线: 134.5小时
- 虫号: 1132188
- 注册: 2010-10-26
- 专业: 兽医免疫学
4楼2012-05-02 14:50:52
5楼2012-05-17 19:41:12
