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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » DH5α转化后 提取质粒提取不出来
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

[求助] DH5α转化后 提取质粒提取不出来 已有9人参与

将pet28α连接目的基因后，转化到DH5α 感受态，，  转化涂布，阴阳性对照都正常，，涂布的板子上至长出了一个菌落，，养菌后，提取质粒，提取不出来，是什么原因呢？    ----  养菌过程中都加了Kana的，浓度是50
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12
1楼 2014-10-19 19:48:17
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593318518

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:26:02
永峰1230: 金币+3, ★有帮助 2014-10-20 17:55:49
pET应该不是高拷贝质粒吧，不知道楼主提没提出来是怎么判断的。
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2楼2014-10-19 21:00:30
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s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:22:58
永峰1230: 金币+4, ★有帮助 2014-10-20 17:55:40
经常有因为小提的kit或者试剂问题提不出质粒的，问问实验室其他最近有提质粒的人kit是不是OK，另外可以做一下菌落PCR，确认楼主的目的片段在细菌里。
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There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
3楼2014-10-19 21:48:31
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 593318518 at 2014-10-19 21:00:30
pET应该不是高拷贝质粒吧，不知道楼主提没提出来是怎么判断的。

在DH5α里 能够拷贝很多的吧，， 试剂盒提取的时候 在加入buffer III 的时候 和正常情况下 相差很大， 跑电泳也没有跑出来
、
其他重组菌用这个 试剂盒 是可以提取出来的
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12
4楼2014-10-20 10:26:13
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-19 21:48:31
经常有因为小提的kit或者试剂问题提不出质粒的，问问实验室其他最近有提质粒的人kit是不是OK，另外可以做一下菌落PCR，确认楼主的目的片段在细菌里。

试剂盒是  没问题的
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12
5楼2014-10-20 10:26:29
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小猪没长毛

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:05:42
可能你那个DH5α的菌种有问题，要不就是你摇菌的时候污染了
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IamOK
6楼2014-10-21 10:16:48
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:05:53
只长出1个菌落，通常是由问题的。请先检测是否连接成功，其次再检测感受态是否有问题
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7楼2014-10-21 10:29:59
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by chenguestc at 2014-10-21 10:29:59
只长出1个菌落，通常是由问题的。请先检测是否连接成功，其次再检测感受态是否有问题

通常能长几个呢？
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12
8楼2014-10-21 14:20:05
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带走云彩

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230: 金币+3, ★有帮助 2014-10-22 17:01:12
永峰1230: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-01-22 08:24:23
就一个单菌落还没有提出质粒，果断杂菌，楼主可观察一下提质粒菌体破碎时是否异常。
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怎知一死生为虚诞？
9楼2014-10-21 17:21:57
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 带走云彩 at 2014-10-21 17:21:57
就一个单菌落还没有提出质粒，果断杂菌，楼主可观察一下提质粒菌体破碎时是否异常。

是异常的， 不是那种含有质粒的菌，提取时的样子
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12
10楼2014-10-22 17:01:05
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