24小时热门版块排行榜    

查看: 3131  |  回复: 23

永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by happydove at 2014-10-23 11:10:02
楼主  直接拿培养好的菌液做模板就可以了  
你涂板子时菌液浓吗?我们做实验也碰到过只长一个的,但鉴定是阳性。不过这种情况不是很正常,只长一个。
菌液低速离心,取部分上清,然后混匀,再取100-200ul的菌液涂 ...

菌液低速离心,取部分上清,然后混匀,再取100-200ul的菌液涂板-------------------------低速离心后 ,转化的菌不是在底部了吗? 取部分上清有什么用呢??
12
21楼2014-10-27 20:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灰血动物

金虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-10-27 20:04:31
低速离心,去上清,剩余部分,全部涂布----感觉转化率不高啊...

挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系,电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外,离心去上清后,需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬,再涂布 你也可以选择不同的体积涂在不同的平板上

还有一个问题,你平板中抗生素的浓度是多少?

平板存放了多久,有一种可能平板表面太干燥,菌体没有涂布均匀。。。

其他的暂时没有想到,如果解决了 请麻烦告诉我哈  谢谢了。。。。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

未完成
22楼2014-10-28 09:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-28 09:56:34
挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系,电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外,离心去上清后,需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬,再涂布 你也可以选择不同的体积涂 ...

转化体系: 载体7 ul, 基因 1 ul, T4 1 ul , T4 buffer 1 ul ,  22℃  2小时,

热激转化 (42℃  90S ),        离心去上清后,,没有把上清去除完全,留有大约100 ul , 重悬后,全部涂布,,   kana 浓度 50ug/ml 。   平板 之前都是存放了将近半个月,,最近都是在一周内使用,,
12
23楼2014-10-28 14:50:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-28 09:56:34
挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系,电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外,离心去上清后,需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬,再涂布 你也可以选择不同的体积涂 ...

最近一次做的, 有一个做菌落PCR 有一个是在 目的基因大小的 片段,正在做了,,希望不要再让我失望了,,, 好烦人这个
12
24楼2014-10-28 14:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 永峰1230 的主题更新
信息提示
请填处理意见