24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3271  |  回复: 23

永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by happydove at 2014-10-23 11:10:02
楼主  直接拿培养好的菌液做模板就可以了  
你涂板子时菌液浓吗?我们做实验也碰到过只长一个的,但鉴定是阳性。不过这种情况不是很正常,只长一个。
菌液低速离心,取部分上清,然后混匀,再取100-200ul的菌液涂 ...

菌液低速离心,取部分上清,然后混匀,再取100-200ul的菌液涂板-------------------------低速离心后 ,转化的菌不是在底部了吗? 取部分上清有什么用呢??
12
21楼2014-10-27 20:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灰血动物

金虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-10-27 20:04:31
低速离心,去上清,剩余部分,全部涂布----感觉转化率不高啊...

挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系,电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外,离心去上清后,需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬,再涂布 你也可以选择不同的体积涂在不同的平板上

还有一个问题,你平板中抗生素的浓度是多少?

平板存放了多久,有一种可能平板表面太干燥,菌体没有涂布均匀。。。

其他的暂时没有想到,如果解决了 请麻烦告诉我哈  谢谢了。。。。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

未完成
22楼2014-10-28 09:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-28 09:56:34
挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系,电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外,离心去上清后,需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬,再涂布 你也可以选择不同的体积涂 ...

转化体系: 载体7 ul, 基因 1 ul, T4 1 ul , T4 buffer 1 ul ,  22℃  2小时,

热激转化 (42℃  90S ),        离心去上清后,,没有把上清去除完全,留有大约100 ul , 重悬后,全部涂布,,   kana 浓度 50ug/ml 。   平板 之前都是存放了将近半个月,,最近都是在一周内使用,,
12
23楼2014-10-28 14:50:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-28 09:56:34
挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系,电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外,离心去上清后,需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬,再涂布 你也可以选择不同的体积涂 ...

最近一次做的, 有一个做菌落PCR 有一个是在 目的基因大小的 片段,正在做了,,希望不要再让我失望了,,, 好烦人这个
12
24楼2014-10-28 14:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 永峰1230 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290调剂生物0860 +37 哇哈哈,。 2026-04-11 43/2150 2026-04-15 18:55 by zhuwenxu
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +11 河南农业大学-能 2026-04-14 11/550 2026-04-15 15:03 by 学员JpLReM
[考博] 26年电池方向博士申请 10+3 15615939259 2026-04-09 4/200 2026-04-15 14:22 by kwansei
[考研] 求调剂 +20 MAX怅惘 2026-04-09 22/1100 2026-04-14 14:57 by 独醉梦孤城
[考研] 食品与营养(0955)271求调剂 +15 升格阿达 2026-04-12 16/800 2026-04-14 13:18 by 浮若_安生
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +7 Ytyt11 2026-04-09 8/400 2026-04-12 16:57 by ajpv风雷
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +5 弱水听文 2026-04-09 5/250 2026-04-12 13:16 by shengxi123
[考研] 调剂求助 +6 果然有我 2026-04-11 7/350 2026-04-11 16:22 by 明月此时有
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 087100初试311求调剂 +4 任雅琴 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:33 by zhq0425
[考研] 085410-273求调剂 +6 X1999 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:32 by Delta2012
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 中科院总分315求调剂 +8 lallalh 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:30 by dick_runner
[考研] 0860004 求调剂 309分 +6 Yin DY 2026-04-09 6/300 2026-04-09 10:19 by 啊李999
信息提示
请填处理意见