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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » DH5α转化后 提取质粒提取不出来
汕头大学海洋科学接受调剂
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by happydove at 2014-10-23 11:10:02
楼主  直接拿培养好的菌液做模板就可以了  
你涂板子时菌液浓吗？我们做实验也碰到过只长一个的，但鉴定是阳性。不过这种情况不是很正常，只长一个。
菌液低速离心，取部分上清，然后混匀，再取100-200ul的菌液涂 ...

菌液低速离心，取部分上清，然后混匀，再取100-200ul的菌液涂板-------------------------低速离心后 ，转化的菌不是在底部了吗？ 取部分上清有什么用呢？？
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12
21楼2014-10-27 20:06:49
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灰血动物

金虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-10-27 20:04:31
低速离心，去上清，剩余部分，全部涂布----感觉转化率不高啊...

挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系，电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外，离心去上清后，需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬，再涂布 你也可以选择不同的体积涂在不同的平板上

还有一个问题，你平板中抗生素的浓度是多少？

平板存放了多久，有一种可能平板表面太干燥，菌体没有涂布均匀。。。

其他的暂时没有想到，如果解决了 请麻烦告诉我哈  谢谢了。。。。
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永峰1230
未完成
22楼2014-10-28 09:56:34
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
22楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-28 09:56:34
挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系，电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外，离心去上清后，需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬，再涂布 你也可以选择不同的体积涂 ...

转化体系： 载体7 ul, 基因 1 ul, T4 1 ul , T4 buffer 1 ul ，  22℃  2小时，

热激转化 （42℃  90S ），        离心去上清后，，没有把上清去除完全，留有大约100 ul ， 重悬后，全部涂布，，   kana 浓度 50ug/ml 。   平板 之前都是存放了将近半个月，，最近都是在一周内使用，，
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12
23楼2014-10-28 14:50:00
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-28 09:56:34
挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系，电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外，离心去上清后，需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬，再涂布 你也可以选择不同的体积涂 ...

最近一次做的， 有一个做菌落PCR 有一个是在 目的基因大小的 片段，正在做了，，希望不要再让我失望了，，， 好烦人这个
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12
24楼2014-10-28 14:51:44
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