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拂晓晨风

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:06:07
重新做转化吧,自己做的感受态涂板,也不会只长一个啊,一般都是长的密密麻麻的很多,怎么也要几百个吧。
11楼2014-10-22 22:10:52
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 拂晓晨风 at 2014-10-22 22:10:52
重新做转化吧,自己做的感受态涂板,也不会只长一个啊,一般都是长的密密麻麻的很多,怎么也要几百个吧。

在重新做,,长的密密麻麻的是 那应该是 至加入水在 不含kana的平皿中吧,,
12
12楼2014-10-23 09:04:41
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yunshenglmm

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
永峰1230: 金币+3, 有帮助 2014-10-23 11:01:18
应该首先做一下菌落PCR,能扩出来目的条带,在进行后续实验
13楼2014-10-23 09:23:31
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-10-23 09:23:31
应该首先做一下菌落PCR,能扩出来目的条带,在进行后续实验

是这样做了,,实验室人说这样不太准确,,这两次就是先做的PCR,是用 菌液PCR(菌液离心洗涤后,加100ul 水 20分钟煮沸,离心上清做模版),,没有做出条带的
12
14楼2014-10-23 11:02:58
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
永峰1230: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-10-23 13:59:45
楼主  直接拿培养好的菌液做模板就可以了  
你涂板子时菌液浓吗?我们做实验也碰到过只长一个的,但鉴定是阳性。不过这种情况不是很正常,只长一个。
菌液低速离心,取部分上清,然后混匀,再取100-200ul的菌液涂板,最好是留出一部分备用,假如板子出问题或涂的不好,可以重新涂的。
15楼2014-10-23 11:10:02
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by happydove at 2014-10-23 11:10:02
楼主  直接拿培养好的菌液做模板就可以了  
你涂板子时菌液浓吗?我们做实验也碰到过只长一个的,但鉴定是阳性。不过这种情况不是很正常,只长一个。
菌液低速离心,取部分上清,然后混匀,再取100-200ul的菌液涂 ...

直接用菌液,PCR条件呢?    图板时菌液浓啊,,低速离心,去上清,剩余部分,全部涂布,,
12
16楼2014-10-23 13:59:37
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灰血动物

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:06:20
永峰1230: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-10-27 20:05:08
楼主在提取质粒以前 有没有对菌株进行验证呢

包括PCR。酶切。测序等。。。

要是没有做的话,这个克隆很可能是污染

你用的转化体系,通常在涂布之前都是要稀释的 因为转化率太高了。。。。。
未完成
17楼2014-10-23 15:29:57
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happydove

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-10-23 13:59:37
直接用菌液,PCR条件呢?    图板时菌液浓啊,,低速离心,去上清,剩余部分,全部涂布,,...

PCR条件差不多,涂布这个很重要,我有试过第一次没长好,剩余的菌液再涂,板子长得很好
18楼2014-10-23 15:56:12
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-23 15:29:57
楼主在提取质粒以前 有没有对菌株进行验证呢

包括PCR。酶切。测序等。。。

要是没有做的话,这个克隆很可能是污染

你用的转化体系,通常在涂布之前都是要稀释的 因为转化率太高了。。。。。

低速离心,去上清,剩余部分,全部涂布----感觉转化率不高啊
12
19楼2014-10-27 20:04:31
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by happydove at 2014-10-23 15:56:12
PCR条件差不多,涂布这个很重要,我有试过第一次没长好,剩余的菌液再涂,板子长得很好...

剩余菌液 还能用于涂布吗?
12
20楼2014-10-27 20:05:00
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