24小时热门版块排行榜    

查看: 3476  |  回复: 23

拂晓晨风

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:06:07
重新做转化吧,自己做的感受态涂板,也不会只长一个啊,一般都是长的密密麻麻的很多,怎么也要几百个吧。
11楼2014-10-22 22:10:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 拂晓晨风 at 2014-10-22 22:10:52
重新做转化吧,自己做的感受态涂板,也不会只长一个啊,一般都是长的密密麻麻的很多,怎么也要几百个吧。

在重新做,,长的密密麻麻的是 那应该是 至加入水在 不含kana的平皿中吧,,
12
12楼2014-10-23 09:04:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunshenglmm

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
永峰1230: 金币+3, 有帮助 2014-10-23 11:01:18
应该首先做一下菌落PCR,能扩出来目的条带,在进行后续实验
13楼2014-10-23 09:23:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-10-23 09:23:31
应该首先做一下菌落PCR,能扩出来目的条带,在进行后续实验

是这样做了,,实验室人说这样不太准确,,这两次就是先做的PCR,是用 菌液PCR(菌液离心洗涤后,加100ul 水 20分钟煮沸,离心上清做模版),,没有做出条带的
12
14楼2014-10-23 11:02:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
永峰1230: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-10-23 13:59:45
楼主  直接拿培养好的菌液做模板就可以了  
你涂板子时菌液浓吗?我们做实验也碰到过只长一个的,但鉴定是阳性。不过这种情况不是很正常,只长一个。
菌液低速离心,取部分上清,然后混匀,再取100-200ul的菌液涂板,最好是留出一部分备用,假如板子出问题或涂的不好,可以重新涂的。
15楼2014-10-23 11:10:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by happydove at 2014-10-23 11:10:02
楼主  直接拿培养好的菌液做模板就可以了  
你涂板子时菌液浓吗?我们做实验也碰到过只长一个的,但鉴定是阳性。不过这种情况不是很正常,只长一个。
菌液低速离心,取部分上清,然后混匀,再取100-200ul的菌液涂 ...

直接用菌液,PCR条件呢?    图板时菌液浓啊,,低速离心,去上清,剩余部分,全部涂布,,
12
16楼2014-10-23 13:59:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灰血动物

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:06:20
永峰1230: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-10-27 20:05:08
楼主在提取质粒以前 有没有对菌株进行验证呢

包括PCR。酶切。测序等。。。

要是没有做的话,这个克隆很可能是污染

你用的转化体系,通常在涂布之前都是要稀释的 因为转化率太高了。。。。。
未完成
17楼2014-10-23 15:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-10-23 13:59:37
直接用菌液,PCR条件呢?    图板时菌液浓啊,,低速离心,去上清,剩余部分,全部涂布,,...

PCR条件差不多,涂布这个很重要,我有试过第一次没长好,剩余的菌液再涂,板子长得很好
18楼2014-10-23 15:56:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-23 15:29:57
楼主在提取质粒以前 有没有对菌株进行验证呢

包括PCR。酶切。测序等。。。

要是没有做的话,这个克隆很可能是污染

你用的转化体系,通常在涂布之前都是要稀释的 因为转化率太高了。。。。。

低速离心,去上清,剩余部分,全部涂布----感觉转化率不高啊
12
19楼2014-10-27 20:04:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by happydove at 2014-10-23 15:56:12
PCR条件差不多,涂布这个很重要,我有试过第一次没长好,剩余的菌液再涂,板子长得很好...

剩余菌液 还能用于涂布吗?
12
20楼2014-10-27 20:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 永峰1230 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +3 哈哈蛤? 2026-08-21 3/150 2026-08-21 10:31 by allmydream
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 我面上完蛋了 +5 且听虎啸 2026-08-20 5/250 2026-08-21 09:48 by climap
[基金申请] 让我中一个面上吧! +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +22 yaoyewhu2008 2026-08-20 24/1200 2026-08-21 07:44 by DanielDDDD
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 言之凿凿,明天官网会通知放榜? +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见