11楼: Originally posted by 拂晓晨风 at 2014-10-22 22:10:52
重新做转化吧，自己做的感受态涂板，也不会只长一个啊，一般都是长的密密麻麻的很多，怎么也要几百个吧。

13楼: Originally posted by yunshenglmm at 2014-10-23 09:23:31
应该首先做一下菌落PCR，能扩出来目的条带，在进行后续实验

15楼: Originally posted by happydove at 2014-10-23 11:10:02
楼主  直接拿培养好的菌液做模板就可以了  
你涂板子时菌液浓吗？我们做实验也碰到过只长一个的，但鉴定是阳性。不过这种情况不是很正常，只长一个。
菌液低速离心，取部分上清，然后混匀，再取100-200ul的菌液涂 ...

16楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-10-23 13:59:37
直接用菌液，PCR条件呢？    图板时菌液浓啊，，低速离心，去上清，剩余部分，全部涂布，，...

17楼: Originally posted by 灰血动物 at 2014-10-23 15:29:57
楼主在提取质粒以前 有没有对菌株进行验证呢

包括PCR。酶切。测序等。。。

要是没有做的话，这个克隆很可能是污染

你用的转化体系，通常在涂布之前都是要稀释的 因为转化率太高了。。。。。

18楼: Originally posted by happydove at 2014-10-23 15:56:12
PCR条件差不多，涂布这个很重要，我有试过第一次没长好，剩余的菌液再涂，板子长得很好...