应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » DH5α转化后 提取质粒提取不出来
241/3返回列表123下一页
查看: 3366  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

永峰1230

铜虫 (小有名气)

[求助] DH5α转化后 提取质粒提取不出来 已有9人参与

将pet28α连接目的基因后，转化到DH5α 感受态，，  转化涂布，阴阳性对照都正常，，涂布的板子上至长出了一个菌落，，养菌后，提取质粒，提取不出来，是什么原因呢？    ----  养菌过程中都加了Kana的，浓度是50
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
12
1楼 2014-10-19 19:48:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

593318518

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:26:02
永峰1230: 金币+3, ★有帮助 2014-10-20 17:55:49
pET应该不是高拷贝质粒吧，不知道楼主提没提出来是怎么判断的。
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-19 21:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:22:58
永峰1230: 金币+4, ★有帮助 2014-10-20 17:55:40
经常有因为小提的kit或者试剂问题提不出质粒的，问问实验室其他最近有提质粒的人kit是不是OK，另外可以做一下菌落PCR，确认楼主的目的片段在细菌里。
赞一下 回复此楼
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
3楼2014-10-19 21:48:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 593318518 at 2014-10-19 21:00:30
pET应该不是高拷贝质粒吧，不知道楼主提没提出来是怎么判断的。

在DH5α里 能够拷贝很多的吧，， 试剂盒提取的时候 在加入buffer III 的时候 和正常情况下 相差很大， 跑电泳也没有跑出来
、
其他重组菌用这个 试剂盒 是可以提取出来的
赞一下 回复此楼
12
4楼2014-10-20 10:26:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-19 21:48:31
经常有因为小提的kit或者试剂问题提不出质粒的，问问实验室其他最近有提质粒的人kit是不是OK，另外可以做一下菌落PCR，确认楼主的目的片段在细菌里。

试剂盒是  没问题的
赞一下 回复此楼
12
5楼2014-10-20 10:26:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猪没长毛

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:05:42
可能你那个DH5α的菌种有问题，要不就是你摇菌的时候污染了
赞一下 回复此楼
IamOK
6楼2014-10-21 10:16:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-24 21:05:53
只长出1个菌落，通常是由问题的。请先检测是否连接成功，其次再检测感受态是否有问题
赞一下 回复此楼
7楼2014-10-21 10:29:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by chenguestc at 2014-10-21 10:29:59
只长出1个菌落，通常是由问题的。请先检测是否连接成功，其次再检测感受态是否有问题

通常能长几个呢？
赞一下 回复此楼
12
8楼2014-10-21 14:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带走云彩

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230: 金币+3, ★有帮助 2014-10-22 17:01:12
永峰1230: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-01-22 08:24:23
就一个单菌落还没有提出质粒，果断杂菌，楼主可观察一下提质粒菌体破碎时是否异常。
赞一下 回复此楼
怎知一死生为虚诞？
9楼2014-10-21 17:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 带走云彩 at 2014-10-21 17:21:57
就一个单菌落还没有提出质粒，果断杂菌，楼主可观察一下提质粒菌体破碎时是否异常。

是异常的， 不是那种含有质粒的菌，提取时的样子
赞一下 回复此楼
12
10楼2014-10-22 17:01:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 永峰1230 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭