应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » DH5α转化后 提取质粒提取不出来
53/1返回列表
查看: 3132  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)

[求助] DH5α转化后 提取质粒提取不出来 已有9人参与

将pet28α连接目的基因后，转化到DH5α 感受态，，  转化涂布，阴阳性对照都正常，，涂布的板子上至长出了一个菌落，，养菌后，提取质粒，提取不出来，是什么原因呢？    ----  养菌过程中都加了Kana的，浓度是50
回复此楼

» 猜你喜欢
12
1楼 2014-10-19 19:48:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

灰血动物

金虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-10-27 20:04:31
低速离心，去上清，剩余部分，全部涂布----感觉转化率不高啊...

挠头中。。。。。

问问实验细节吧 转化体系，电击时间等等。。。。这个体系基本上随便转化都会得到很多克隆的

另外，离心去上清后，需要加入少量的LB或者水将“沉淀”重悬，再涂布 你也可以选择不同的体积涂在不同的平板上

还有一个问题，你平板中抗生素的浓度是多少？

平板存放了多久，有一种可能平板表面太干燥，菌体没有涂布均匀。。。

其他的暂时没有想到，如果解决了 请麻烦告诉我哈  谢谢了。。。。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

永峰1230
未完成
22楼2014-10-28 09:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

593318518

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:26:02
永峰1230: 金币+3, ★有帮助 2014-10-20 17:55:49
pET应该不是高拷贝质粒吧，不知道楼主提没提出来是怎么判断的。
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-19 21:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:22:58
永峰1230: 金币+4, ★有帮助 2014-10-20 17:55:40
经常有因为小提的kit或者试剂问题提不出质粒的，问问实验室其他最近有提质粒的人kit是不是OK，另外可以做一下菌落PCR，确认楼主的目的片段在细菌里。
赞一下 回复此楼
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
3楼2014-10-19 21:48:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 593318518 at 2014-10-19 21:00:30
pET应该不是高拷贝质粒吧，不知道楼主提没提出来是怎么判断的。

在DH5α里 能够拷贝很多的吧，， 试剂盒提取的时候 在加入buffer III 的时候 和正常情况下 相差很大， 跑电泳也没有跑出来
、
其他重组菌用这个 试剂盒 是可以提取出来的
赞一下 回复此楼
12
4楼2014-10-20 10:26:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭