应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 质粒和片段连接后，酶切验证错误！（求大神指导）
51/1返回列表
查看: 2206  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

人于两点

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒和片段连接后，酶切验证错误！（求大神指导）已有2人参与

如图所示，line 1和2 是质粒和片段（图片不清晰，用红线代替）连接后的酶切验证
质粒大小为4570bp 片段大小为750bp
因为把连接好的质粒送过去测序，发现正向引物F（片段的）测序无信号，反向引物R（片段的）测序是正确的。
所以，想酶切验证一下，发现酶切下来的片段大小不对，酶切的片段大小约为1000，而目的片段为750bp。
哪位大神告诉我是什么原因啊？

质粒和片段连接后，酶切验证错误！（求大神指导）
图片1.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2014-10-18 12:58:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 人于两点 at 2014-10-19 14:54:21
额，那为什么我测序结果是对的？...

楼主测序的正向引物是从质粒上开始还是从目标片段上开始读的？
赞一下 回复此楼
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
4楼2014-10-19 14:58:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

s_lich28

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-19 18:18:13
楼主的目标片段大小是750bp，但图中lane 2中楼主用红线标注出来的片段如果是实际接入的片段的话那长度是1kb，所以建议楼主验证目标片段后再做链接。
赞一下 回复此楼
There is nothing either good or bad, thinking makes it so.
2楼2014-10-18 21:47:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-18 21:47:41
楼主的目标片段大小是750bp，但图中lane 2中楼主用红线标注出来的片段如果是实际接入的片段的话那长度是1kb，所以建议楼主验证目标片段后再做链接。

额，那为什么我测序结果是对的？
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-19 13:54:21
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by s_lich28 at 2014-10-19 14:58:44
楼主测序的正向引物是从质粒上开始还是从目标片段上开始读的？...

正反引物都是质粒的通用引物（都是在质粒酶切位点上）
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-19 16:55:00
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭