应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR明显有目标条带，酶切验证却不对，测序也没结果
71/1返回列表
查看: 4240  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weilan-Joden

新虫 (初入文坛)

[交流] 菌落PCR明显有目标条带，酶切验证却不对，测序也没结果 已有6人参与

质粒双酶切，割胶回收，感觉还是有杂带，没有进I啊哦带一步纯化直接酶连，大肠长出来之后做菌落PCR，有一株菌有明显条带，但是提取质粒进行双酶切验证却没有切成功，用引物对质粒进行PCR，有两条非常明显的条带，这是为什么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-17 18:50:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
菌落pcr经常有非特异性带

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-17 22:16:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cnzpli

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的pcr酶切都对就是测序不对

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-18 09:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

593318518

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得就是你的酶切位点突变了。测序就知道了
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-18 10:36:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-22 12:26:46
PCR存在假阳性，应该以酶切结果为准！有时候个别克隆酶切位点会有突变，这也是不能用的！质粒作为模板P的效果相对特异些，但不敢保证完全正确，有时候引物非特异扩增会显示载体序列！建议再挑克隆，pcr检测后再酶切检测！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
5楼2014-10-18 12:51:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiongxiong5900

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-22 12:26:50
菌落直接PCR会有假阳性。想避免假阳性出现又想通过PCR的方法鉴定的话，可以将单克隆挑起，摇成菌液，之后用菌液做模板进行PCR。再看看能不能扩出来。
如果能扩出特异条带，再菌液提取质粒，质粒再酶切鉴定，如果酶切条带也对的话，再送测序。
赞一下 回复此楼
6楼2014-10-21 16:00:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alian1111

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
假阳性，我们也遇到过
赞一下 回复此楼
7楼2015-05-30 16:18:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员a5ng8S 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 277 数一104，学硕，求调剂 +17 瓶子PZ 2026-04-09 18/900 2026-04-10 22:47 by 来看流星雨10
[考研] 284求调剂 +19 梵@@ 2026-04-06 21/1050 2026-04-10 21:12 by zhouxiaoyu
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +5 0856?调剂 2026-04-10 5/250 2026-04-10 20:45 by yukihao
[考研] 一志愿沪9，326生物学求相关专业调剂 +4 刘墨墨 2026-04-09 4/200 2026-04-10 12:07 by pengliang8036
[考研] 调剂 +4 青灯不负 2026-04-09 4/200 2026-04-10 09:55 by LHGeng
[考研] 初试分332，一志愿报考西北工业大学， +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 085400 328分 求调剂 +8 喂你一个大橙子 2026-04-09 12/600 2026-04-09 19:20 by zl8213662
[考研] 291分调剂 +3 上岸小莹加油 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:28 by 1753564080
[考研] 337求调剂 +4 Gky09300550， 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:18 by 帕尔马拉特
[考研] 085600，321分求调剂 +19 大馋小子 2026-04-04 20/1000 2026-04-09 14:12 by Delta2012
[考研] 材料与化工专硕306分找合适调剂 +27 沧海轻舟e 2026-04-06 28/1400 2026-04-08 22:06 by wdyheheeh
[考研] 一志愿南昌大学，085600，344分求调剂 +11 调剂上岸玘 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:17 by luoyongfeng
[考研] 264求调剂 +11 麦小叮当 2026-04-07 11/550 2026-04-08 16:05 by 一只好果子?
[考研] 一志愿哈工大，初试329，求环境科学与工程调剂！ +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 22408 266求调剂 +11 masss11222 2026-04-07 14/700 2026-04-08 11:06 by yulian1987
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 278求调剂 +14 范婷娜 2026-04-04 15/750 2026-04-04 22:15 by lqwchd
[考研] 26调剂 086003 +6 失活的细胞 2026-04-04 6/300 2026-04-04 09:50 by zhangdingwa
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭