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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR明显有目标条带，酶切验证却不对，测序也没结果
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weilan-Joden

新虫 (初入文坛)

[交流] 菌落PCR明显有目标条带，酶切验证却不对，测序也没结果已有6人参与

质粒双酶切，割胶回收，感觉还是有杂带，没有进I啊哦带一步纯化直接酶连，大肠长出来之后做菌落PCR，有一株菌有明显条带，但是提取质粒进行双酶切验证却没有切成功，用引物对质粒进行PCR，有两条非常明显的条带，这是为什么？
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1楼2014-10-17 18:50:58
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xiongxiong5900

木虫 (小有名气)
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-22 12:26:50
菌落直接PCR会有假阳性。想避免假阳性出现又想通过PCR的方法鉴定的话，可以将单克隆挑起，摇成菌液，之后用菌液做模板进行PCR。再看看能不能扩出来。
如果能扩出特异条带，再菌液提取质粒，质粒再酶切鉴定，如果酶切条带也对的话，再送测序。
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6楼2014-10-21 16:00:45
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)
菌落pcr经常有非特异性带

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2楼2014-10-17 22:16:23
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cnzpli

金虫 (正式写手)
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我的pcr酶切都对就是测序不对

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3楼2014-10-18 09:08:27
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593318518

新虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得就是你的酶切位点突变了。测序就知道了
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4楼2014-10-18 10:36:05
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