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weilan-Joden

新虫 (初入文坛)

[交流] 菌落PCR明显有目标条带,酶切验证却不对,测序也没结果 已有6人参与

质粒双酶切,割胶回收,感觉还是有杂带,没有进I啊哦带一步纯化直接酶连,大肠长出来之后做菌落PCR,有一株菌有明显条带,但是提取质粒进行双酶切验证却没有切成功,用引物对质粒进行PCR,有两条非常明显的条带,这是为什么?
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xiongxiong5900

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-10-22 12:26:50
菌落直接PCR会有假阳性。想避免假阳性出现又想通过PCR的方法鉴定的话,可以将单克隆挑起,摇成菌液,之后用菌液做模板进行PCR。再看看能不能扩出来。
如果能扩出特异条带,再菌液提取质粒,质粒再酶切鉴定,如果酶切条带也对的话,再送测序。
6楼2014-10-21 16:00:45
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


菌落pcr经常有非特异性带

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-10-17 22:16:23
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cnzpli

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的pcr酶切都对就是测序不对

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-10-18 09:08:27
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593318518

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我觉得就是你的酶切位点突变了。测序就知道了
4楼2014-10-18 10:36:05
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