应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA电泳图 ， 大家帮忙分析下 ， 问题出在哪里 ？
111/2返回列表12下一页
查看: 2804  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Devil_Jimmy

银虫 (小有名气)

[求助] RNA电泳图 ， 大家帮忙分析下 ， 问题出在哪里 ？ 已有4人参与

昨天提取的RNA ，完了跑了个电泳，结果不咋地，今天又重新跑了一次，结果跟昨天不一样了，希望跑过的达人们帮忙分析下，是什么原因导致这样的结果？
Trizol法提取RNA，用的枪头是买的RNase free的，而且经过高压灭菌的。电泳用的设备也用DEPC水清洗过了。
RNA用DEPC水20ul溶解后，取2ul加4ul的5×loading buffer  120V  20分钟左右。
接下来要合成cDNA第一链，完了做Real Time PCR  这样的RNA能不能继续进行下面的实验？

RNA电泳图 ， 大家帮忙分析下 ， 问题出在哪里 ？
今天的.jpg


RNA电泳图 ， 大家帮忙分析下 ， 问题出在哪里 ？-1
昨天下午的.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
神外
1楼 2014-10-06 15:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Devil_Jimmy(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-10-06 18:59:55
Devil_Jimmy: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-10-06 22:32:29
不知是该抨击这家的 “TRIzol”，还是该批评你的操作手法，导致最后的 RNA 有如此多的 DNA 残留。
无法回答这样的 RNA 是否可以做你最关心的后续实验，因为即使你的引物设计使你不怕 DNA 残留，纯度怎样，以及其它的可能影响后续实验的问题，都只有你自己知道。
就 TRIzol 抽提 RNA 的操作，如果出现了过量的 DNA 残留，一定同时会导致其它东西 - 包括蛋白，苯酚，盐 - 的残留增加。
我的建议是：你首先要解决如何降低 DNA 残留问题，即使单纯的 DNA 残留对你的后续实验没有影响。当 DNA 残留降低到几乎看不见时，讨论其它问题才更有意义。
至于为什么第二天电泳，RNA 反而显得更漂亮，我的解释是：用非变性电泳方式电泳 RNA，RNA 的表现就像猫，你无法掌控。只要在 RNA 该出现的大概位置出现了荧光，或者更直接的讲，只要在溴酚蓝前面没有出现非常非常巨大的荧光，RNA 即使有降解，也不严重。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-10-06 18:17:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

fuchange918

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Devil_Jimmy(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-06 18:58:25
Devil_Jimmy: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-10-06 22:29:10
不能荧光定量吧，从胶上看DNA、蛋白质或多糖等污染相当严重。楼主是不是在氯仿抽提那一步吸取上清的时候太贪多了，这一步不要贪多，宁缺毋滥（或者是用氯仿抽屉两次也可以，第二遍时上清与氯仿等体积）。还有楼主最后溶解RNA的时候是不是有很多不溶物质？如果是，应该是多糖污染严重。
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-06 17:48:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LI斯

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 就会提核酸 at 2014-10-06 18:17:34
不知是该抨击这家的 “TRIzol”，还是该批评你的操作手法，导致最后的 RNA 有如此多的 DNA 残留。
无法回答这样的 RNA 是否可以做你最关心的后续实验，因为即使你的引物设计使你不怕 DNA 残留，纯度怎样，以及其它 ...

有五条带是因为同时有DNA和蛋白质是吗？？如果把DNA和蛋白质都除掉了这个能不能做荧光定量我是超级新手
赞一下 回复此楼
呵呵
4楼2014-10-06 21:04:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biot

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-06 22:37:43
RNA的纯度很低，不适合做定量。建议重提，让条带清晰，没有污染，操作要注意啊！同意楼上的详细解释

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
扬帆起航！
5楼2014-10-06 22:11:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanwq258

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA太多了，下次除一下DNA吧，这个。。定量是没法做的
赞一下 回复此楼
要么好好活，要么死，拒绝半死不活
6楼2014-10-06 22:30:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanwq258

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Devil_Jimmy: 金币+5, ★有帮助 2014-10-07 09:45:03
按说trizol一般不会提出这么多DNA的啊，你这个。。。
赞一下 回复此楼
要么好好活，要么死，拒绝半死不活
7楼2014-10-06 22:31:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Devil_Jimmy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-10-06 17:48:19
不能荧光定量吧，从胶上看DNA、蛋白质或多糖等污染相当严重。楼主是不是在氯仿抽提那一步吸取上清的时候太贪多了，这一步不要贪多，宁缺毋滥（或者是用氯仿抽屉两次也可以，第二遍时上清与氯仿等体积）。还有楼主最 ...

感谢回复  我下次吸取上清时尽量小心  另外再按你说的  第一步提两次试试效果
赞一下 回复此楼
神外
8楼2014-10-06 22:31:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Devil_Jimmy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 就会提核酸 at 2014-10-06 18:17:34
不知是该抨击这家的 “TRIzol”，还是该批评你的操作手法，导致最后的 RNA 有如此多的 DNA 残留。
无法回答这样的 RNA 是否可以做你最关心的后续实验，因为即使你的引物设计使你不怕 DNA 残留，纯度怎样，以及其它 ...

感谢帮忙分析  Trizol是invitrogen的  照说是没问题的  必然是我操作的问题了  呵呵 我再继续练习吧 至少知道了可能存在的问题
赞一下 回复此楼
神外
9楼2014-10-06 22:36:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

就会提核酸

铜虫 (初入文坛)
★
Devil_Jimmy(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-07 18:32:25
引用回帖:
4楼: Originally posted by LI斯 at 2014-10-06 21:04:05
有五条带是因为同时有DNA和蛋白质是吗？？如果把DNA和蛋白质都除掉了这个能不能做荧光定量我是超级新手...

只有 4 条带，最下面的是加样孔。其亮度比较重，可推断含蛋白+DNA。用 TRIzol 抽提 RNA，如果 DNA 残留很少，一般纯度都会比较高的，直接往下做应该受到鼓励，尽管先鼓励测一下纯度。
赞一下 回复此楼
10楼2014-10-07 00:07:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Devil_Jimmy 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭