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Devil_Jimmy银虫 (小有名气)
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RNA电泳图 ， 大家帮忙分析下 ， 问题出在哪里 ？ 已有4人参与
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昨天提取的RNA ，完了跑了个电泳，结果不咋地，今天又重新跑了一次，结果跟昨天不一样了，希望跑过的达人们帮忙分析下，是什么原因导致这样的结果？ Trizol法提取RNA，用的枪头是买的RNase free的，而且经过高压灭菌的。电泳用的设备也用DEPC水清洗过了。 RNA用DEPC水20ul溶解后，取2ul加4ul的5×loading buffer 120V 20分钟左右。 接下来要合成cDNA第一链，完了做Real Time PCR 这样的RNA能不能继续进行下面的实验？  今天的.jpg  昨天下午的.jpg |
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不知是该抨击这家的 “TRIzol”，还是该批评你的操作手法，导致最后的 RNA 有如此多的 DNA 残留。 无法回答这样的 RNA 是否可以做你最关心的后续实验，因为即使你的引物设计使你不怕 DNA 残留，纯度怎样，以及其它的可能影响后续实验的问题，都只有你自己知道。 就 TRIzol 抽提 RNA 的操作，如果出现了过量的 DNA 残留，一定同时会导致其它东西 - 包括蛋白，苯酚，盐 - 的残留增加。 我的建议是：你首先要解决如何降低 DNA 残留问题，即使单纯的 DNA 残留对你的后续实验没有影响。当 DNA 残留降低到几乎看不见时，讨论其它问题才更有意义。 至于为什么第二天电泳，RNA 反而显得更漂亮，我的解释是：用非变性电泳方式电泳 RNA，RNA 的表现就像猫，你无法掌控。只要在 RNA 该出现的大概位置出现了荧光，或者更直接的讲，只要在溴酚蓝前面没有出现非常非常巨大的荧光，RNA 即使有降解，也不严重。 |
3楼2014-10-06 18:17:34
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