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神外

1楼2014-10-06 15:11:40

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就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

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Devil_Jimmy: 金币+20, ★★★很有帮助 2014-10-06 22:32:29

不知是该抨击这家的 “TRIzol”，还是该批评你的操作手法，导致最后的 RNA 有如此多的 DNA 残留。
无法回答这样的 RNA 是否可以做你最关心的后续实验，因为即使你的引物设计使你不怕 DNA 残留，纯度怎样，以及其它的可能影响后续实验的问题，都只有你自己知道。
就 TRIzol 抽提 RNA 的操作，如果出现了过量的 DNA 残留，一定同时会导致其它东西 - 包括蛋白，苯酚，盐 - 的残留增加。
我的建议是：你首先要解决如何降低 DNA 残留问题，即使单纯的 DNA 残留对你的后续实验没有影响。当 DNA 残留降低到几乎看不见时，讨论其它问题才更有意义。
至于为什么第二天电泳，RNA 反而显得更漂亮，我的解释是：用非变性电泳方式电泳 RNA，RNA 的表现就像猫，你无法掌控。只要在 RNA 该出现的大概位置出现了荧光，或者更直接的讲，只要在溴酚蓝前面没有出现非常非常巨大的荧光，RNA 即使有降解，也不严重。

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3楼2014-10-06 18:17:34

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fuchange918

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Devil_Jimmy: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-10-06 22:29:10

不能荧光定量吧，从胶上看DNA、蛋白质或多糖等污染相当严重。楼主是不是在氯仿抽提那一步吸取上清的时候太贪多了，这一步不要贪多，宁缺毋滥（或者是用氯仿抽屉两次也可以，第二遍时上清与氯仿等体积）。还有楼主最后溶解RNA的时候是不是有很多不溶物质？如果是，应该是多糖污染严重。

2楼2014-10-06 17:48:19

LI斯

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 就会提核酸 at 2014-10-06 18:17:34
不知是该抨击这家的 “TRIzol”，还是该批评你的操作手法，导致最后的 RNA 有如此多的 DNA 残留。
无法回答这样的 RNA 是否可以做你最关心的后续实验，因为即使你的引物设计使你不怕 DNA 残留，纯度怎样，以及其它 ...

有五条带是因为同时有DNA和蛋白质是吗？？如果把DNA和蛋白质都除掉了这个能不能做荧光定量

我是超级新手

呵呵

4楼2014-10-06 21:04:05

biot

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-06 22:37:43

RNA的纯度很低，不适合做定量。建议重提，让条带清晰，没有污染，操作要注意啊！同意楼上的详细解释

[ 发自小木虫客户端 ]

扬帆起航！

5楼2014-10-06 22:11:30

fanwq258

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DNA太多了，下次除一下DNA吧，这个。。定量是没法做的

要么好好活，要么死，拒绝半死不活

6楼2014-10-06 22:30:12

fanwq258

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Devil_Jimmy: 金币+5, ★有帮助 2014-10-07 09:45:03

按说trizol一般不会提出这么多DNA的啊，你这个。。。

要么好好活，要么死，拒绝半死不活

7楼2014-10-06 22:31:25

Devil_Jimmy

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引用回帖:

2楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-10-06 17:48:19
不能荧光定量吧，从胶上看DNA、蛋白质或多糖等污染相当严重。楼主是不是在氯仿抽提那一步吸取上清的时候太贪多了，这一步不要贪多，宁缺毋滥（或者是用氯仿抽屉两次也可以，第二遍时上清与氯仿等体积）。还有楼主最 ...

感谢回复我下次吸取上清时尽量小心另外再按你说的第一步提两次试试效果

神外

8楼2014-10-06 22:31:56