应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒双酶切 多条带
51/1返回列表
查看: 3676  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

pursuream

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 质粒双酶切 多条带 已有1人参与

最近一直在纠结于在用于绿脓杆菌表达的载体pMMB67EH上做构建，质粒空载有8800bp。用EcoRI、HindIII双酶切，每次都切出至少两条带。分别回收了做连接从未成功，负对照也没长过点。同样的酶不管是不是HF，切其它质粒都正常。求问，两条亮带，那条靠谱些？有什么改进方案么？多谢！如果有谁搞过这个质粒，或者知道其他的绿脓杆菌表达质粒就太好了。


不是时间过久的问题，二十五分钟就切成这样了：
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-17 19:36:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoujin09

铜虫 (初入文坛)
请问你这个问题最后解决了吗？我现在也做这个质粒，跟你一样的问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-10-31 17:23:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
pursuream: 金币+5, ★有帮助 2014-10-17 09:48:07
我觉得你这个没有多大问题，只要你选择正确的条带切胶纯化，然后进行连接转化就可以了，你这个量有点少，建议一次量多点，不然切胶后纯化的量很少，影响后续连接~
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-17 09:20:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pursuream

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 永远一片天 at 2014-10-17 09:20:58
我觉得你这个没有多大问题，只要你选择正确的条带切胶纯化，然后进行连接转化就可以了，你这个量有点少，建议一次量多点，不然切胶后纯化的量很少，影响后续连接~

谢谢你！终于有人鸟我。
但实际上我两条带都试过，始终没做出来，条带一直不正常，上次很认真地新提的空载质粒酶切后下面2.5kb还有明显的亮带。已经尽量避免星号活性了。搞得整个人都不好，对连接体系都没有信心了。
打算用重组kit做了。
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-17 09:55:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 0856材料调剂 +4 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:19 by 公瑾逍遥
[基金申请] 此成果不能导入原因：元数据必填信息不完整，可 进行补充。 +3 Kittylucky 2026-03-02 4/200 2026-03-02 09:48 by kingkocxr
[考研] 材料学调剂 +10 提神豆沙包 2026-02-28 12/600 2026-03-02 09:26 by 李老师！
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 13/650 2026-03-02 07:27 by 好好好1233
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭