24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3713  |  回复: 3

pursuream

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 质粒双酶切 多条带 已有1人参与

最近一直在纠结于在用于绿脓杆菌表达的载体pMMB67EH上做构建,质粒空载有8800bp。用EcoRI、HindIII双酶切,每次都切出至少两条带。分别回收了做连接从未成功,负对照也没长过点。同样的酶不管是不是HF,切其它质粒都正常。求问,两条亮带,那条靠谱些?有什么改进方案么?多谢!如果有谁搞过这个质粒,或者知道其他的绿脓杆菌表达质粒就太好了。


不是时间过久的问题,二十五分钟就切成这样了:
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
pursuream: 金币+5, 有帮助 2014-10-17 09:48:07
我觉得你这个没有多大问题,只要你选择正确的条带切胶纯化,然后进行连接转化就可以了,你这个量有点少,建议一次量多点,不然切胶后纯化的量很少,影响后续连接~
2楼2014-10-17 09:20:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pursuream

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 永远一片天 at 2014-10-17 09:20:58
我觉得你这个没有多大问题,只要你选择正确的条带切胶纯化,然后进行连接转化就可以了,你这个量有点少,建议一次量多点,不然切胶后纯化的量很少,影响后续连接~

谢谢你!终于有人鸟我。
但实际上我两条带都试过,始终没做出来,条带一直不正常,上次很认真地新提的空载质粒酶切后下面2.5kb还有明显的亮带。已经尽量避免星号活性了。搞得整个人都不好,对连接体系都没有信心了。
打算用重组kit做了。
3楼2014-10-17 09:55:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoujin09

铜虫 (初入文坛)

请问你这个问题最后解决了吗?我现在也做这个质粒,跟你一样的问题

发自小木虫IOS客户端
4楼2017-10-31 17:23:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pursuream 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工调剂一志愿大连海事085600,349 +6 吃的不少 2026-03-30 6/300 2026-03-31 04:17 by fmesaito
[考研] 哈尔滨工业大学材料与化工专硕378求调剂 +3 塔比乌斯 2026-03-30 3/150 2026-03-30 22:55 by 无际的草原
[考研] 一志愿中海洋材料357 +3 麦恩莉. 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:01 by chixmc
[考研] 调剂 +4 GK72 2026-03-30 4/200 2026-03-30 20:32 by dick_runner
[考研] 309求调剂 +15 谁不是少年 2026-03-29 15/750 2026-03-30 19:28 by 2026材料调剂
[考研] 085601材料工程找调剂 +17 oatmealR 2026-03-29 18/900 2026-03-30 19:21 by Wang200018
[考研] 289求调剂 +16 新时代材料 2026-03-27 16/800 2026-03-30 19:04 by Wang200018
[考研] 342求调剂 +4 加油a李zs 2026-03-26 4/200 2026-03-30 16:39 by 晶体之美
[考研] 0703化学 +14 妮妮ninicgb 2026-03-27 14/700 2026-03-30 12:46 by fangnagu
[考研] 311求调剂 +10 lin0039 2026-03-26 10/500 2026-03-30 10:26 by herarysara
[考研] 290求调剂 +3 dfffsar 2026-03-29 3/150 2026-03-29 22:38 by 毛毛毛阿莫2
[考研] 【求调剂】085601材料工程专硕 | 总分272 | +7 脚滑的守法公民 2026-03-27 7/350 2026-03-29 20:21 by dophin1985
[考研] 332求92调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 085600,专业课化工原理,321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 数一英一271专硕(085401)求调剂,可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 316求调剂 +7 江辞666 2026-03-26 7/350 2026-03-28 21:28 by sanrepian
[考研] 一志愿郑大085600,310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 打过很多竞赛,085406控制工程300分,求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
信息提示
请填处理意见