24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3714  |  回复: 3

pursuream

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 质粒双酶切 多条带 已有1人参与

最近一直在纠结于在用于绿脓杆菌表达的载体pMMB67EH上做构建,质粒空载有8800bp。用EcoRI、HindIII双酶切,每次都切出至少两条带。分别回收了做连接从未成功,负对照也没长过点。同样的酶不管是不是HF,切其它质粒都正常。求问,两条亮带,那条靠谱些?有什么改进方案么?多谢!如果有谁搞过这个质粒,或者知道其他的绿脓杆菌表达质粒就太好了。


不是时间过久的问题,二十五分钟就切成这样了:
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永远一片天

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
pursuream: 金币+5, 有帮助 2014-10-17 09:48:07
我觉得你这个没有多大问题,只要你选择正确的条带切胶纯化,然后进行连接转化就可以了,你这个量有点少,建议一次量多点,不然切胶后纯化的量很少,影响后续连接~
2楼2014-10-17 09:20:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pursuream

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 永远一片天 at 2014-10-17 09:20:58
我觉得你这个没有多大问题,只要你选择正确的条带切胶纯化,然后进行连接转化就可以了,你这个量有点少,建议一次量多点,不然切胶后纯化的量很少,影响后续连接~

谢谢你!终于有人鸟我。
但实际上我两条带都试过,始终没做出来,条带一直不正常,上次很认真地新提的空载质粒酶切后下面2.5kb还有明显的亮带。已经尽量避免星号活性了。搞得整个人都不好,对连接体系都没有信心了。
打算用重组kit做了。
3楼2014-10-17 09:55:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoujin09

铜虫 (初入文坛)

请问你这个问题最后解决了吗?我现在也做这个质粒,跟你一样的问题

发自小木虫IOS客户端
4楼2017-10-31 17:23:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pursuream 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +3 GENJIOW 2026-03-31 3/150 2026-03-31 12:49 by 上岸快快
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利|求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 16/800 2026-03-31 12:15 by oooqiao
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-03-30 10/500 2026-03-31 11:41 by AZMK
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +5 这是有太阳哇 2026-03-25 5/250 2026-03-31 09:59 by luoyongfeng
[考研] 0856调剂 +6 曲听筠 2026-03-30 6/300 2026-03-31 09:44 by Jaylen.
[考研] 281求调剂 +5 亚克西good 2026-03-26 7/350 2026-03-30 20:42 by dophin1985
[考研] 一志愿:西北大学,英一数一408-284分求调剂 +5 12.27 2026-03-27 5/250 2026-03-30 19:31 by 源_2020
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +12 辰沐5211314 2026-03-26 12/600 2026-03-30 19:28 by Wang200018
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂!!! +5 贝呗钡钡 2026-03-30 5/250 2026-03-30 18:16 by 无际的草原
[考研] 材料化工340求调剂 +3 jhx777 2026-03-30 3/150 2026-03-30 17:54 by JourneyLucky
[考研] 071010 323 分求调剂 +3 Baekzhy 2026-03-27 3/150 2026-03-30 14:24 by andresqi
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-24 6/300 2026-03-29 20:45 by 无际的草原
[考研] 085600,专业课化工原理,321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 085602 化工专硕 338分 求调剂 +12 路痴小琪 2026-03-27 12/600 2026-03-28 15:41 by L135790
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 12:04 by 王保杰33
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
信息提示
请填处理意见