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走过路过的大侠帮忙啊-----重组质粒转化后抽提质粒浓度低 已有3人参与
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| 请问各位大侠，我将目的片段和载体，双酶切（快切）20min，跑胶检验没问题后连接转化，然后挑取一些菌株活化抽提质粒，检测出来质粒浓度20-30ng/ul,不知道是为什么，请各位走过路过的大侠指点迷津！！！！！！！ |
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youlinglyw
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2楼2014-09-16 21:09:23
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
你这个问题可以从两方面来考虑： 首先，不知道楼主有没有检测抽提出来的质粒是否为所需的质粒（可以PCR鉴定和酶切鉴定），如果是，那么说明之前的酶切、连接、转化是没有问题的，那么问题就出来抽提质粒上，可能的原因有两个，一是菌的问题，即浓度太低或者或者质粒兼容性不好，前者解决办法就是加长摇菌时间，后者解决办法就是换感受态菌株，重新转化； 第二，如果检测结果表明所抽提核酸（可能是混进的菌株基因组DNA或者RNA）不是所需质粒，那么问题就在酶切、连接、转化上了，建议逐一排查各步可能出现的问题，方法就是加进阴性对照和阳性对照。 个人见解，仅供参考 |
3楼2014-09-16 22:12:46
4楼2014-09-17 08:56:50
5楼2014-09-17 08:59:37
6楼2014-09-17 21:40:10
7楼2014-09-18 09:52:07
gongeleven
铁杆木虫 (正式写手)
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8楼2014-09-18 22:41:04
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5