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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 走过路过的大侠帮忙啊-----重组质粒转化后抽提质粒浓度低
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冯英慧1101

新虫 (初入文坛)

[求助] 走过路过的大侠帮忙啊-----重组质粒转化后抽提质粒浓度低 已有3人参与

请问各位大侠，我将目的片段和载体，双酶切（快切）20min，跑胶检验没问题后连接转化，然后挑取一些菌株活化抽提质粒，检测出来质粒浓度20-30ng/ul,不知道是为什么，请各位走过路过的大侠指点迷津！！！！！！！
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1楼 2014-09-16 20:57:18
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去哪里看海

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 冯英慧1101 at 2014-09-18 09:52:07
用微量紫外分光光度计...

微量紫外分光光度计？好吧，谢谢楼主
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10楼2014-09-22 10:45:10
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
摇菌时间多久？我一般是37度摇床过夜。
你可以对比下菌液和培养基颜色，看有没有培养起来
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天行健
2楼2014-09-16 21:09:23
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个问题可以从两方面来考虑：
首先，不知道楼主有没有检测抽提出来的质粒是否为所需的质粒（可以PCR鉴定和酶切鉴定），如果是，那么说明之前的酶切、连接、转化是没有问题的，那么问题就出来抽提质粒上，可能的原因有两个，一是菌的问题，即浓度太低或者或者质粒兼容性不好，前者解决办法就是加长摇菌时间，后者解决办法就是换感受态菌株，重新转化；
第二，如果检测结果表明所抽提核酸（可能是混进的菌株基因组DNA或者RNA）不是所需质粒，那么问题就在酶切、连接、转化上了，建议逐一排查各步可能出现的问题，方法就是加进阴性对照和阳性对照。


个人见解，仅供参考
赞一下(1人) 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
3楼2014-09-16 22:12:46
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冯英慧1101

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王平阳 at 2014-09-16 22:12:46
你这个问题可以从两方面来考虑：
首先，不知道楼主有没有检测抽提出来的质粒是否为所需的质粒（可以PCR鉴定和酶切鉴定），如果是，那么说明之前的酶切、连接、转化是没有问题的，那么问题就出来抽提质粒上，可能的 ...

恩恩，好的，谢谢。弱弱的问句，酶切、连接和转化的阴阳性对照分别是什么啊？
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4楼2014-09-17 08:56:50
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