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diqilvyinyun银虫 (初入文坛)
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重组质粒转入BL21后，平板可以长，但挑单克隆菌摇不起来 已有11人参与
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多次尝试，不是挑没挑上的问题，不是抗生素的问题，不是培养基的问题； 也曾做实验，同一管子里的菌取一些用于摇菌，取一些涂平板，过夜培养，平板长菌，试管菌还是没有要起来； 过夜摇菌后培养基呈类似悬浊液，图片如下： 求大神指教，还有是否有人也遇到过类似情况，望指点一二，以助小弟走出困境。  IMG_2850.JPG  IMG_2852.JPG 左边为无菌培养基，右边为过夜摇菌后的菌液； |
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luwei13566
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+6, 鼓励交流！ 2014-06-02 23:43:14
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1.你平板上长的单菌落是不是BL21啊？菌落形态是E.coli的标准形态吗，你的平板做过鉴定吗，就是拿不带质粒的菌直接涂版看看你的板子抗生素是否失效了。 2.你试管里过夜摇的菌不是E.coli应有状态，正常的大肠杆菌过夜摇那应该是很浑浊的，就算重组质粒和宿主不兼容菌长的稀过夜也是薄薄的雾状，你摇的菌类似一种菌聚合到一起的状态，这种状态只在我以前冬天制备酵母感受态接摇瓶摇3—4个小时出现过，而且比你的还要密集。所以你的菌最好确认一下是否是大肠杆菌。 3.你用的抗生素是什么？最好同时接两个试管，一个含抗生素，一个不含，同时摇过夜看看是否一致来排除抗生素或者你的菌表达的抗性物质而导致的菌扩大培养形态异常的问题。 4.你是过夜摇菌，那你确认过你的菌是不是先浑浊然后又变清澈还是从摇菌开始一直就是这种悬浮状态。如果是前者那你得筛查下是否污染噬菌体了。除了你遇到这种情况你实验室是否有其他人也有类似情况啊？你早上摇上菌每隔1h看看 |
6楼2014-06-02 14:50:19
dulei
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【答案】应助回帖
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确定是噬菌体污染。 噬菌体对于平板上的菌影响不大，但是对于液体的菌影响比较大，过夜培养就呈现你这种状况的悬浊液，那是菌体裂解了，如果观察仔细，会发现，被噬菌体污染的菌，先长到一定浓度，然后裂解成菌体聚集的絮状物。这种状态通常发生在春季和夏季。 解决方案： 1、实验室过夜灭菌（紫外、甲醛、臭氧灭菌）。 2、噬菌体污染的培养基，发现及时灭菌。 3、对于你这个实验，你可以从平板上多挑几个菌落，通常情况下，不是所有的菌落都被污染了，我遇到过挑10个菌，有2-5个是污染的。所以多挑几个会挑到没有污染的。 夏天做实验要控制好，实验室空调调到26度，注意通风，保持卫生是关键。 有问题再交流。 |
16楼2014-06-04 09:31:37
dongbinbin89
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3楼2014-06-02 09:07:44
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4楼2014-06-02 12:43:46
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5楼2014-06-02 14:36:47
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7楼2014-06-02 17:34:48
朱多龙
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8楼2014-06-02 18:19:21
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