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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒转入BL21后，平板可以长，但挑单克隆菌摇不起来
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒转入BL21后，平板可以长，但挑单克隆菌摇不起来 已有11人参与

多次尝试，不是挑没挑上的问题，不是抗生素的问题，不是培养基的问题；
也曾做实验，同一管子里的菌取一些用于摇菌，取一些涂平板，过夜培养，平板长菌，试管菌还是没有要起来；
过夜摇菌后培养基呈类似悬浊液，图片如下：
求大神指教，还有是否有人也遇到过类似情况，望指点一二，以助小弟走出困境。

重组质粒转入BL21后，平板可以长，但挑单克隆菌摇不起来
IMG_2850.JPG


重组质粒转入BL21后，平板可以长，但挑单克隆菌摇不起来-1
IMG_2852.JPG

左边为无菌培养基，右边为过夜摇菌后的菌液；
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为梦想而努力！
1楼 2014-06-02 08:45:42
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+6, 鼓励交流！ 2014-06-02 23:43:14
1.你平板上长的单菌落是不是BL21啊？菌落形态是E.coli的标准形态吗，你的平板做过鉴定吗，就是拿不带质粒的菌直接涂版看看你的板子抗生素是否失效了。
2.你试管里过夜摇的菌不是E.coli应有状态，正常的大肠杆菌过夜摇那应该是很浑浊的，就算重组质粒和宿主不兼容菌长的稀过夜也是薄薄的雾状，你摇的菌类似一种菌聚合到一起的状态，这种状态只在我以前冬天制备酵母感受态接摇瓶摇3—4个小时出现过，而且比你的还要密集。所以你的菌最好确认一下是否是大肠杆菌。
3.你用的抗生素是什么？最好同时接两个试管，一个含抗生素，一个不含，同时摇过夜看看是否一致来排除抗生素或者你的菌表达的抗性物质而导致的菌扩大培养形态异常的问题。
4.你是过夜摇菌，那你确认过你的菌是不是先浑浊然后又变清澈还是从摇菌开始一直就是这种悬浮状态。如果是前者那你得筛查下是否污染噬菌体了。除了你遇到这种情况你实验室是否有其他人也有类似情况啊？你早上摇上菌每隔1h看看
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大家相互帮助哈
6楼2014-06-02 14:50:19
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dulei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定是噬菌体污染。
噬菌体对于平板上的菌影响不大，但是对于液体的菌影响比较大，过夜培养就呈现你这种状况的悬浊液，那是菌体裂解了，如果观察仔细，会发现，被噬菌体污染的菌，先长到一定浓度，然后裂解成菌体聚集的絮状物。这种状态通常发生在春季和夏季。
解决方案：
1、实验室过夜灭菌（紫外、甲醛、臭氧灭菌）。
2、噬菌体污染的培养基，发现及时灭菌。
3、对于你这个实验，你可以从平板上多挑几个菌落，通常情况下，不是所有的菌落都被污染了，我遇到过挑10个菌，有2-5个是污染的。所以多挑几个会挑到没有污染的。

夏天做实验要控制好，实验室空调调到26度，注意通风，保持卫生是关键。

有问题再交流。
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16楼2014-06-04 09:31:37
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dongbinbin89

金虫 (初入文坛)

idoubind

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确定不是培养基的问题？怎么知道的

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-06-02 09:01:58
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dongbinbin89 at 2014-06-02 09:01:58
你确定不是培养基的问题？怎么知道的

同样的培养基，同时摇菌，接的别的菌正常摇出，没有任何问题
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为梦想而努力！
3楼2014-06-02 09:07:44
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miao1991

新虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2014-06-02 12:43:46
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by miao1991 at 2014-06-02 12:43:46
抗性没错吧，板子上的板子有没有失效？

必须没有，板子和管子用的是同一管抗生素
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为梦想而努力！
5楼2014-06-02 14:36:47
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-02 14:50:19
1.你平板上长的单菌落是不是BL21啊？菌落形态是E.coli的标准形态吗，你的平板做过鉴定吗，就是拿不带质粒的菌直接涂版看看你的板子抗生素是否失效了。
2.你试管里过夜摇的菌不是E.coli应有状态，正常的大肠杆菌过夜 ...

谢谢，给了我很多思路，我进一步验证一下
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为梦想而努力！
7楼2014-06-02 17:34:48
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-06-02 23:43:35
楼主的状况很可能是噬菌体污染造成的，之前遇到过类似情况。你确定你的感受态细胞是新的？有没有反复冻融？有没有污染？
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8楼2014-06-02 18:19:21
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-02 23:43:55
看你菌的状态，是菌有问题。
BL21摇不起来的话不会是这种澄清里面带着小颗粒沉淀。而是那种水里有尘沙的样子，而且颜色是有点黄。
最好检查一下BL21感受态有没有搞错或者什么的。
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9楼2014-06-02 19:13:34
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-06-02 23:44:14
会不会本底表达的蛋白对宿主有毒性造成的？个人感觉还是噬菌体污染的可能性大些
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爱拼才会赢
10楼2014-06-02 20:19:19
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