应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Ecoli 重组蛋白表达
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 1383  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tyslfzc

银虫 (初入文坛)

[求助] Ecoli 重组蛋白表达

想请教一下，用ecoli系统表达重组蛋白，两次expression的 cell 可以放在一起 进行后续纯化吗？就是lysis, 然后过各种affinity column/size exclusion column... 谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-16 11:10:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tyslfzc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-19 23:47:30
你做小量表达检测时看到克隆之间有差别？...

没有阿，我没有做任何检测，直接表达的，就是单纯是不同的colony
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2013-07-21 04:53:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
tyslfzc(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-16 13:56:53
如果只是为了纯化蛋白，可以合并细胞样品。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-16 11:38:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没问题啊   蛋白都是一样的
赞一下 回复此楼
hold住
3楼2013-07-16 16:04:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tyslfzc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 11:38:26
如果只是为了纯化蛋白，可以合并细胞样品。

可是两次cell里面自带的一些酶不会相互影响吗？我指至少在lysate之后？
我这么问是因为表达的时候，都要求pick single colony，因为有这些限制。
所以我才怀疑，后续有没有影响。
谢谢！
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-17 07:30:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhxq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我经常需要表达大量的蛋白，瓶子不够大，所以经常这么干，个人感觉没什么影响。
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-17 09:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 07:49:00
引用回帖:
4楼: Originally posted by tyslfzc at 2013-07-17 07:30:08
可是两次cell里面自带的一些酶不会相互影响吗？我指至少在lysate之后？
我这么问是因为表达的时候，都要求pick single colony，因为有这些限制。
所以我才怀疑，后续有没有影响。
谢谢！...

挑单克隆在鉴定克隆时是非常必要的，后面经验证正确的单克隆再次划线、活化时不一定挑单克隆。你现在是做纯化了，摇菌的时候都是从同一克隆划线活化出来的，所以没有太大关系。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-17 09:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tyslfzc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hhxq at 2013-07-17 09:22:58
我经常需要表达大量的蛋白，瓶子不够大，所以经常这么干，个人感觉没什么影响。

好吧，谢谢！
回复此楼
7楼2013-07-19 08:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tyslfzc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-17 09:42:32
挑单克隆在鉴定克隆时是非常必要的，后面经验证正确的单克隆再次划线、活化时不一定挑单克隆。你现在是做纯化了，摇菌的时候都是从同一克隆划线活化出来的，所以没有太大关系。...

不是，问题就是expression 就是从不同的colony分别expression的，这才是问题。。。
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-19 08:15:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by tyslfzc at 2013-07-19 08:15:34
不是，问题就是expression 就是从不同的colony分别expression的，这才是问题。。。...

你做小量表达检测时看到克隆之间有差别？
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-19 23:47:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tyslfzc 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 数一英一 347 人工智能国奖论文都有求调剂 +3 乌拉儿山脉 2026-03-30 7/350 2026-04-05 10:32 by zhq0425
[考研] 求调剂 +3 小沢 2026-04-03 3/150 2026-04-05 09:10 by sihailian3
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
[考研] 材料工程085601数二英一335求调剂 +6 双马尾痞老板2 2026-03-31 6/300 2026-04-04 22:29 by hemengdong
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 调剂 +11 JLLLLLLLLLL 2026-04-03 11/550 2026-04-04 22:21 by hemengdong
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] 环境285分，过六级，求调剂 +10 xhr12 2026-04-02 10/500 2026-04-04 21:53 by bn53987
[考研] 315求调剂 +13 小羊小羊_ 2026-04-02 14/700 2026-04-04 20:30 by 蓝云思雨
[考研] 311求调剂 +11 勇敢的小吴 2026-04-02 11/550 2026-04-03 21:46 by qlm5820
[考研] 考研调剂 +8 不爱喝饮料 2026-04-03 8/400 2026-04-03 16:40 by Mistake-J
[考研] 材料调剂 +4 一样YWY 2026-04-03 4/200 2026-04-03 09:48 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:49 by liumengping
[考研] 学硕化学工程与技术，一志愿中国海洋大学320+求调剂 +8 披星河 2026-04-02 8/400 2026-04-02 14:12 by oooqiao
[考研] 311求调剂 +14 蓝月亮亮 2026-03-30 14/700 2026-04-02 12:18 by 1753564080
[考研] 11408 321分求调剂 +3 huchun12138 2026-03-30 4/200 2026-04-01 22:48 by guanxin1001
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭