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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Ecoli 重组蛋白表达
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tyslfzc

银虫 (初入文坛)

[求助] Ecoli 重组蛋白表达

想请教一下，用ecoli系统表达重组蛋白，两次expression的 cell 可以放在一起 进行后续纯化吗？就是lysis, 然后过各种affinity column/size exclusion column... 谢谢！
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1楼 2013-07-16 11:10:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tyslfzc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-19 23:47:30
你做小量表达检测时看到克隆之间有差别？...

没有阿，我没有做任何检测，直接表达的，就是单纯是不同的colony
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10楼2013-07-21 04:53:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
tyslfzc(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-16 13:56:53
如果只是为了纯化蛋白，可以合并细胞样品。
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2楼2013-07-16 11:38:26
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没问题啊   蛋白都是一样的
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hold住
3楼2013-07-16 16:04:05
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tyslfzc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 11:38:26
如果只是为了纯化蛋白，可以合并细胞样品。

可是两次cell里面自带的一些酶不会相互影响吗？我指至少在lysate之后？
我这么问是因为表达的时候，都要求pick single colony，因为有这些限制。
所以我才怀疑，后续有没有影响。
谢谢！
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4楼2013-07-17 07:30:08
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hhxq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我经常需要表达大量的蛋白，瓶子不够大，所以经常这么干，个人感觉没什么影响。
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5楼2013-07-17 09:22:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 07:49:00
引用回帖:
4楼: Originally posted by tyslfzc at 2013-07-17 07:30:08
可是两次cell里面自带的一些酶不会相互影响吗？我指至少在lysate之后？
我这么问是因为表达的时候，都要求pick single colony，因为有这些限制。
所以我才怀疑，后续有没有影响。
谢谢！...

挑单克隆在鉴定克隆时是非常必要的，后面经验证正确的单克隆再次划线、活化时不一定挑单克隆。你现在是做纯化了，摇菌的时候都是从同一克隆划线活化出来的，所以没有太大关系。
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6楼2013-07-17 09:42:32
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tyslfzc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hhxq at 2013-07-17 09:22:58
我经常需要表达大量的蛋白，瓶子不够大，所以经常这么干，个人感觉没什么影响。

好吧，谢谢！
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7楼2013-07-19 08:14:29
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tyslfzc

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-17 09:42:32
挑单克隆在鉴定克隆时是非常必要的，后面经验证正确的单克隆再次划线、活化时不一定挑单克隆。你现在是做纯化了，摇菌的时候都是从同一克隆划线活化出来的，所以没有太大关系。...

不是，问题就是expression 就是从不同的colony分别expression的，这才是问题。。。
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8楼2013-07-19 08:15:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by tyslfzc at 2013-07-19 08:15:34
不是，问题就是expression 就是从不同的colony分别expression的，这才是问题。。。...

你做小量表达检测时看到克隆之间有差别？
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9楼2013-07-19 23:47:30
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