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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒 转化 植物愈伤组织
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浅笑包包

新虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒 转化 植物愈伤组织 已有2人参与

最近在做重组质粒转化植物愈伤组织的实验，现在重组质粒已经构建好了，问题是重组质粒上连接的目的基因就是我要转化的植物本身的某一个基因，重组质粒上有gus基因可以进行gus染色来初步确定是否转化成功，但是gus染色法不太准确，所以想请教大牛们，我有什么办法可以确定我的转化成功了，我现在没有时间再重现构建质粒了，因为植物本身含有这个基因，我也不能进行一般的PCR和southern blot进行确定，还有什么办法呢？？？对了，目的基因的pcr引物就只是在两端加入了酶切位点其他的没有什么特别的了。
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Be the change you want to see in the world.
1楼 2014-08-03 17:56:57
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
问问你老板
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2楼2014-08-04 09:34:03
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liusong0725

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以设计夸载体与目的基因的引物或是GUS引物检测，这样应该可以验证。另外GUS染色你说不可靠，其实GUS活性还是可以测定的，用荧光分光光度计。
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3楼2014-08-11 21:43:22
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lhxbio

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

在紧连基因的5‘上游的载体序列设计一条引物，再用基因下游的引物做个PCR就Ok了。
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4楼2014-08-12 12:18:07
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