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农杆菌如何帮助重组质粒整合到植物染色体上？
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| 利用农杆菌侵染植物，农杆菌如何将重组质粒整合到植物染色体上，重组质粒的导入会不会影响植物染色体本身的表达，比如插入到某些基因中，使某些基因不能正常表达 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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gyesang
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amisking: 回帖置顶 2012-12-06 20:08:51
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1949stone: MolEPI+1, very good 2012-12-07 07:33:26
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1 利用农杆菌侵染植物，农杆菌如何将重组质粒整合到植物染色体上 农杆菌转外源基因基本原理： 农杆菌转化系统是一种天然的基因转化系统。农杆菌分为根瘤农杆菌和发根农杆菌。根瘤农杆菌中含有肿瘤诱导（T)质粒,Ti质粒上含有可转移 DNA(T-DNA)区、毒性区(Vir区)以及冠瘿碱代谢基因编码区。T-DNA两端是两个25 bp的重复序列， 分别称为左边界和右边界,两个边界序列之间是生 长素和细胞分裂素合成基因以及冠瘿碱合成基因。 Vir区中也含有多个基因段，如FiM、FirB、FirC、 VirD.、VirE、VirG、VirH等，每个基因段都含有多个基因。当植物受到伤害时,分泌含有酚类化合物的汁液,这些酚类化合物一方面通过染色体毒性基因 (chvA、chvB等介导的趋化性促使农杆菌向植物受伤部位移动并附着于植物细胞表面;另一方面则被Ti质粒上由VirA和VirG组成的双组分调节系统识别,从而诱导其他Vir的表达。VirD1和VirD2共同作用，由T-DNA右边界开始向左边界切割产生 —条T-DNA单链，并与Vir其它表达蛋白结合成复合体转移到农杆菌外,然后进入细胞到达细胞核内并整合到细胞染色体上。 T-DNA的转移只与两个边界序列有关，尤其右边界对T-DNA的准确转移是不可缺少的，而边界序列之间含有什么基因并不影响T-DNA的转 移。因此，可以用外源基因代替T-DNA区内的基因，进而利用农杆菌将这个改造后的T-DNA转移 到植物基因组中，这样就可以获得所希望得到的转基因植株。随着对农杆菌转化系统的了解不断深 入,人们对Ti质粒进行了多种方式的改造,使载体系统不断更新，转化效率逐渐成熟，应用范围越来越广泛。 2. 重组质粒的导入会不会影响植物染色体本身的表达，比如插入到某些基因中，使某些基因不能正常表达 肯定是会的，比如现在有很多的T-DNA插入突变体，就是利用T-DNA插入到基因中间导致基因失活，从而制备出突变体。 因此， 如果你是做基因过表达，最好是筛选两柱以上，T-DNA插在基因组不同位置，但能重复同一表型的 如果你是做基因敲除，你也要选两柱以上，插在同一基因内但在不同位置，表型一致 |
2楼2012-12-06 16:43:05
3楼2012-12-06 18:38:17
gyesang
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1949stone: 非常喜欢这样的 2012-12-07 08:09:33
hany1234: 金币+5, ★★★很有帮助, 兄台 两个问题都是你回答的哈 给力 虽然还是有点小疑惑 还是很感谢:) 2012-12-07 12:40:06
1949stone: 非常喜欢这样的 2012-12-07 08:09:33
hany1234: 金币+5, ★★★很有帮助, 兄台 两个问题都是你回答的哈 给力 虽然还是有点小疑惑 还是很感谢:) 2012-12-07 12:40:06
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T-DNA插入是不定点，在染色体上随机插入，但是也是有一点偏好性，比如在染色体着丝粒处插入的概率可能就会小一些，而且T-DNA在染色体上的插入方向也不定 “随机插入的话，情况就复杂了 还有你最后说的两种情况 让T-DNA插在基因组不同位置 怎么插入不同个位置啊” 随机插入的话，为什么会复杂啊，让T-DNA插在基因组不同位置，你是不同控制的，真是因为其随机插入，所以找到两个植株插入点不再同一位置还是很容易的，你做转基因植物不只是就做一株出来，用southern blot一筛选，就出来了 |
4楼2012-12-06 19:08:14
5楼2013-04-08 20:26:47
zsykk123
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6楼2013-04-10 08:55:37
