| 查看: 2199 | 回复: 9 | |||
[求助]
走过路过的大侠帮忙啊-----重组质粒转化后抽提质粒浓度低 已有3人参与
|
| 请问各位大侠，我将目的片段和载体，双酶切（快切）20min，跑胶检验没问题后连接转化，然后挑取一些菌株活化抽提质粒，检测出来质粒浓度20-30ng/ul,不知道是为什么，请各位走过路过的大侠指点迷津！！！！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
PYD1重组质粒转化酿酒酵母后为什么长出的阳性斑PCR扩不出目的片段？
已经有97人回复
- 重组质粒 转化 植物愈伤组织
已经有3人回复
- 重组质粒转入BL21后，平板可以长，但挑单克隆菌摇不起来
已经有17人回复
- 酵母重组质粒转化酵母后，长出的斑有大有小
已经有5人回复
- 重组质粒构建 连接转化效率低 求帮助啊
已经有19人回复
- 菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？
已经有13人回复
- 重组质粒提取，结果提取片段跑胶 比实际还大，请各位大侠给指点一下
已经有13人回复
- 连接效率低，重组质粒无法酶切
已经有5人回复
- 重组质粒，摇菌提取质粒后，如何测序？
已经有5人回复
- 新人，请大侠赐教：构建重组质粒选择双酶切还是单酶切？
已经有13人回复
- pPICZαC质粒抽提浓度低
已经有6人回复
- 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？
已经有7人回复
- 重组质粒转化之前需要酶切验证吗
已经有5人回复
- 农杆菌如何帮助重组质粒整合到植物染色体上？
已经有5人回复
- 重组质粒转化，板子上总长杂菌
已经有5人回复
- 原核表达重组质粒提取
已经有7人回复
- 求助：重组质粒酶切问题！请大家帮我解决一下，急！
已经有7人回复
- 十万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序有结果，但反复说我质粒浓度很低
已经有16人回复
- 【求助/交流】试剂盒提取重组质粒的A260/A280=2.08,求帮忙分析一下
已经有4人回复
- 【求助/交流】我用菌液摇菌抽提质粒浓度很低，请大家帮忙解决下，为什么
已经有16人回复
- 【求助/交流】重组质粒转化
已经有22人回复
youlinglyw
荣誉版主 (著名写手)
一匡天下
-
专家经验: +37 - BioEPI: 5
- 应助: 136 (高中生)
- 贵宾: 0.077
- 金币: 8052.9
- 散金: 8858
- 红花: 208
- 沙发: 2
- 帖子: 1511
- 在线: 263.8小时
- 虫号: 787036
- 注册: 2009-06-04
- 性别: GG
- 专业: 认知科学
- 管辖: 生物科学
2楼2014-09-16 21:09:23
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
你这个问题可以从两方面来考虑： 首先，不知道楼主有没有检测抽提出来的质粒是否为所需的质粒（可以PCR鉴定和酶切鉴定），如果是，那么说明之前的酶切、连接、转化是没有问题的，那么问题就出来抽提质粒上，可能的原因有两个，一是菌的问题，即浓度太低或者或者质粒兼容性不好，前者解决办法就是加长摇菌时间，后者解决办法就是换感受态菌株，重新转化； 第二，如果检测结果表明所抽提核酸（可能是混进的菌株基因组DNA或者RNA）不是所需质粒，那么问题就在酶切、连接、转化上了，建议逐一排查各步可能出现的问题，方法就是加进阴性对照和阳性对照。 个人见解，仅供参考 |
3楼2014-09-16 22:12:46
4楼2014-09-17 08:56:50
5楼2014-09-17 08:59:37
6楼2014-09-17 21:40:10
7楼2014-09-18 09:52:07
gongeleven
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 55 (初中生)
- 金币: 7107.8
- 散金: 222
- 红花: 3
- 帖子: 432
- 在线: 152.9小时
- 虫号: 1082982
- 注册: 2010-08-27
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
8楼2014-09-18 22:41:04
9楼2014-09-19 08:15:44
10楼2014-09-22 10:45:10
