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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 单酶切后载体变小
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小小菲菲427

新虫 (初入文坛)

[求助] 单酶切后载体变小 已有4人参与

新手实验，遇到一点困难，还望各位大神解答啊！用T-easy载体连接PCR产物后，转化，提取，单酶切，电泳后验证发现载体竟然变小了！空载体应该是3015bp，可电泳后只跑出了2800bp，这是肿么回事呢？各位大神帮帮小弟吧！不胜感激！
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1楼 2014-09-11 16:01:08
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huyan0817

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小小菲菲427(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-12 10:46:47
楼主看看T载体上面所含的酶切为点吧！可能是载体上面也有你所切的酶切位点或者是分析下你的目的基因片段，可能你的目的基因也含这个酶切位点！如果都不是的话，楼主可以试一试电压小点比如60V跑电泳！祝实验顺利！
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2楼2014-09-11 16:38:41
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kehan777

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-12 10:46:57
单酶切，如果该酶在该载体上有两个酶切位点，切出两条带，其中一条太小看不出来也有可能
另外，电泳的原因：
其实3000和2800距离很近，你再可以跑久一些，（前提是胶够长，电压可降低一点）
也有可能是你的基因问题，切不开的质粒是否会跑得快一些？可以再做个双酶切鉴定
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3楼2014-09-12 07:51:36
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kuenyunliu

铜虫 (初入文坛)
你知道是单酶切，这么自信？
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4楼2014-09-18 21:41:17
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

如果有2个酶切位点就小了
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5楼2014-09-19 09:38:21
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
小小菲菲427(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-19 16:33:50
仔细分析一下序列，建议在目的基因找一个位点，在载体上找一个位点双切。
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6楼2014-09-19 10:38:07
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
xxxxxx

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2014-09-19 10:42:12
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