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Insecta_A铜虫 (小有名气)
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大家帮我看看这个PCR如何进行优化 已有4人参与
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求大神帮我看看，我的PCR产物量每次都很少，但引物二聚体较多，已做过Primer的优化，但是还是去除不了，而且每次照相都感觉很模糊，下面图片有一张是用手机照的 反应体系20ul: Mg2+: 2mM, dNTPs: 0.5mM, Taq酶: 2U, 10X PCR Buffer: 1X, Primer each 0.45uM,(我做的是双重PCR，共两队引物) Template DNA: 180ng. 反应条件及程序: 采用Touchdown PCR 程序：94℃ 预变性2min； 以下只进行一次循环：94℃ 变性15s, 61/59/57/55℃退火30s, 72℃延伸45s；再进行36次循环：94℃ 变性15s, 53℃退火30s, 72℃延伸45s；72℃最后延伸2min；4℃保存。  Administrator 2014-08-29 1hr 2min.jpg  Administrator 2014-08-29 11hr 45min.jpg |
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