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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR需要怎么优化
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莉莉儿baby

新虫 (初入文坛)

[交流] 荧光定量PCR需要怎么优化

荧光定量PCR已经做了很多次了，退火温度55、56、58、60都试过了，但是就是没有跑出好的带来，到底会是什么原因，需要怎么优化体系。引物的TM值为57.9
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1楼 2013-08-25 19:42:50
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)
★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
再试试别的退火温度看看。
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2楼2013-08-25 19:50:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
扩增曲线是否正常？CT值多少？
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5楼2013-08-25 23:17:37
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biosafety

铁杆木虫 (正式写手)
★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
引物探针的组合筛选，引物探针的浓度组合，不同的试剂盒选择。
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6楼2013-08-26 05:44:27
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vicky8685

银虫 (初入文坛)
★ ★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-06 13:10:59
反应液和引物探针是关键，反应液里的dNTPs、镁离子的浓度需要优化，引物探针（自己设计的话）需要添加量组合优化，上机条件需要根据你的引物探针的设计做适当调整
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7楼2013-08-26 08:56:49
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love_st

金虫 (著名写手)
★ ★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-06 13:11:06
好的引物探针，在一定的浓度范围内都可以扩增，如不同的TM值，不同的dNTPs、镁离子等
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8楼2013-08-26 15:54:14
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cake2003

银虫 (小有名气)
★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
没图你说个捷豹
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9楼2013-09-06 00:05:29
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hyc_charles

金虫 (小有名气)
★ ★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-14 10:04:48
不一定是退火温度问题吧，你首先要保证引物的特异性没问题，还有你的样品没讲解污染
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10楼2013-10-14 09:57:14
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lefantian1223楼
2013-08-25 20:00   回复  
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
yingying15884楼
2013-08-25 21:32   回复  
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
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