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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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莉莉儿baby

新虫 (初入文坛)


[交流] 荧光定量PCR需要怎么优化

荧光定量PCR已经做了很多次了,退火温度55、56、58、60都试过了,但是就是没有跑出好的带来,到底会是什么原因,需要怎么优化体系。引物的TM值为57.9
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)



莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
再试试别的退火温度看看。
2楼2013-08-25 19:50:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)



莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
扩增曲线是否正常?CT值多少?
5楼2013-08-25 23:17:37
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biosafety

铁杆木虫 (正式写手)



莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
引物探针的组合筛选,引物探针的浓度组合,不同的试剂盒选择。
6楼2013-08-26 05:44:27
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vicky8685

银虫 (初入文坛)


★ ★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-06 13:10:59
反应液和引物探针是关键,反应液里的dNTPs、镁离子的浓度需要优化,引物探针(自己设计的话)需要添加量组合优化,上机条件需要根据你的引物探针的设计做适当调整
7楼2013-08-26 08:56:49
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love_st

金虫 (著名写手)


★ ★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-06 13:11:06
好的引物探针,在一定的浓度范围内都可以扩增,如不同的TM值,不同的dNTPs、镁离子等
8楼2013-08-26 15:54:14
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cake2003

银虫 (小有名气)



莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
没图你说个捷豹
9楼2013-09-06 00:05:29
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hyc_charles

金虫 (小有名气)


★ ★
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-14 10:04:48
不一定是退火温度问题吧,你首先要保证引物的特异性没问题,还有你的样品没讲解污染
10楼2013-10-14 09:57:14
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简单回复
2013-08-25 20:00   回复  
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
2013-08-25 21:32   回复  
莉莉儿baby(金币+1): 谢谢参与
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