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wulelexinhun

银虫 (初入文坛)

[求助] 3885bp大小的基因如何进行PCR效果比较好 已有8人参与

跪求各位大神,3885bp大小的基因如何进行PCR效果比较好?最好是不能有突变
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用好点的酶吧,其实3000多不算长的,不想突变用高保真酶
2楼2014-08-23 07:40:01
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用高保真酶直接拉呗
没有做不到,只有想不到!
3楼2014-08-25 22:19:30
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中庸001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接拿高保真酶p就行,这不算什么太大的难p片段啊。
4楼2014-08-26 08:57:40
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)

推荐个酶,NEB的Fhusion,很好用,货号 M0531S 不是广告,真的不错就是有点贵!
多多交流,海纳百川
5楼2014-08-26 10:34:24
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ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wulelexinhun(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-26 22:23:46
用高保真的酶PCR吧,我们实验室用的是primeSTAR,如果你发现效果不好的话,可以用巢式PCR~~
6楼2014-08-26 12:47:32
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匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
7楼2014-08-27 22:32:12
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ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by pf790352975 at 2014-08-27 22:32:12
prime  star max 6kb的应该没问题吧   目前在做重叠pcr 理论上连接后接近6kb 但是做了两次都没p出  之前用该酶重叠pcr出 3600kb的片段  不知道你p过最长的是多少  还有说明书上推荐的5-10s/kb 你试验过吗?谢谢...

我在PCR一个大概2100bp的时候,常规条件没有P出来,后来按照说明说条件试了下
98°  10s
55°  15s
72°   1min30s
是巢式PCR   因为我要在这个基因的后边加上一个大概60bp的片段,是用引物加上的
8楼2014-08-28 10:25:19
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

首选Pfu酶,高保真;
如果不能扩增这么长的片段再用LA Taq,保真性比较高,扩增长片段。
9楼2014-08-28 10:27:05
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轻风伊始

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Primerstar保真性不错,3点多不算长的,overlap pcr就是再长一点也能搞定……大胆的去做吧,祝楼主顺利……

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2014-08-28 11:03:10
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