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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3885bp大小的基因如何进行PCR效果比较好
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wulelexinhun

银虫 (初入文坛)

[求助] 3885bp大小的基因如何进行PCR效果比较好 已有8人参与

跪求各位大神，3885bp大小的基因如何进行PCR效果比较好？最好是不能有突变
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乐
1楼 2014-08-22 23:47:49
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用好点的酶吧，其实3000多不算长的，不想突变用高保真酶
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2楼2014-08-23 07:40:01
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用高保真酶直接拉呗
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没有做不到，只有想不到！
3楼2014-08-25 22:19:30
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中庸001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接拿高保真酶p就行，这不算什么太大的难p片段啊。
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4楼2014-08-26 08:57:40
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)
推荐个酶，NEB的Fhusion，很好用，货号 M0531S 不是广告，真的不错就是有点贵！
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多多交流，海纳百川
5楼2014-08-26 10:34:24
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ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
wulelexinhun(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-26 22:23:46
用高保真的酶PCR吧，我们实验室用的是primeSTAR，如果你发现效果不好的话，可以用巢式PCR~~
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6楼2014-08-26 12:47:32
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匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
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7楼2014-08-27 22:32:12
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ncuduhan

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by pf790352975 at 2014-08-27 22:32:12
prime  star max 6kb的应该没问题吧   目前在做重叠pcr 理论上连接后接近6kb 但是做了两次都没p出  之前用该酶重叠pcr出 3600kb的片段  不知道你p过最长的是多少  还有说明书上推荐的5-10s/kb 你试验过吗？谢谢...

我在PCR一个大概2100bp的时候，常规条件没有P出来，后来按照说明说条件试了下
98°  10s
55°  15s
72°   1min30s
是巢式PCR   因为我要在这个基因的后边加上一个大概60bp的片段，是用引物加上的
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8楼2014-08-28 10:25:19
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

首选Pfu酶，高保真；
如果不能扩增这么长的片段再用LA Taq，保真性比较高，扩增长片段。
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9楼2014-08-28 10:27:05
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轻风伊始

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Primerstar保真性不错，3点多不算长的，overlap pcr就是再长一点也能搞定……大胆的去做吧，祝楼主顺利……

[ 发自小木虫客户端 ]
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10楼2014-08-28 11:03:10
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