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乐

1楼2014-08-22 23:47:49

bwangel

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【答案】应助回帖

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用好点的酶吧，其实3000多不算长的，不想突变用高保真酶

2楼2014-08-23 07:40:01

王平阳

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【答案】应助回帖

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用高保真酶直接拉呗

没有做不到，只有想不到！

3楼2014-08-25 22:19:30

中庸001

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直接拿高保真酶p就行，这不算什么太大的难p片段啊。

4楼2014-08-26 08:57:40

令狐少陈

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推荐个酶，NEB的Fhusion，很好用，货号 M0531S 不是广告，真的不错就是有点贵！

多多交流，海纳百川

5楼2014-08-26 10:34:24

ncuduhan

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wulelexinhun(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-26 22:23:46

用高保真的酶PCR吧，我们实验室用的是primeSTAR，如果你发现效果不好的话，可以用巢式PCR~~

6楼2014-08-26 12:47:32

匿名

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7楼2014-08-27 22:32:12

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ncuduhan

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引用回帖:

7楼: Originally posted by pf790352975 at 2014-08-27 22:32:12
prime star max 6kb的应该没问题吧目前在做重叠pcr 理论上连接后接近6kb 但是做了两次都没p出之前用该酶重叠pcr出 3600kb的片段不知道你p过最长的是多少还有说明书上推荐的5-10s/kb 你试验过吗？谢谢...

我在PCR一个大概2100bp的时候，常规条件没有P出来，后来按照说明说条件试了下
98° 10s
55° 15s
72° 1min30s
是巢式PCR 因为我要在这个基因的后边加上一个大概60bp的片段，是用引物加上的

8楼2014-08-28 10:25:19