24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2417  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qauzgd

铁虫 (初入文坛)

[求助] T载体连接问题 已有2人参与

大家好,我的目的片段1600多点,PCR出来后要做测序然后农杆菌转化植株的。
PCR的产物长度正常,连PMD-18T载体,转DH5α,蓝白斑(有蓝白斑但是很稀)。
然后就出问题了,摇起来的菌液用上述的引物PCR,要么没东西要么2000+的产物,2000+的菌液去生工测序,回了俩片段都是载体序列。

求问是哪里出问题啊,连T载体做了快一个月了,一直这样。。实在不行我就拿PCR产物去生工测了。。。谢谢大家!

补上句,其他人用同样地酶和载体.菌,连T载体,一次就连上了。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

考拉003

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangranjun at 2014-08-17 19:05:20
PCR产物纯化后有没有加A尾巴?没有加的话很难连接上去的……

一般rtaqPCR都会自动加A的。这位仁兄的问题就是载体自连了吧。。。。。换个载体试试,我们用的pGEM--T载体,还好
不是微生物专业的却进入微生物行业
4楼2014-08-17 19:41:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

owl2010

金虫 (正式写手)

★ ★
qauzgd(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:34:37
目测T载体自连,T载体2000多bp,片段1600,算是大片段了,几百bp连T很容易连进去的,应该好好按摩尔比算一下。 另外你可以用M13引物去P一下2000多的菌液,顺便做个水对照看一下。
男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
2楼2014-08-17 18:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR产物纯化后有没有加A尾巴?没有加的话很难连接上去的……
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
3楼2014-08-17 19:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qauzgd: 金币+3 2014-09-13 19:44:44
1.末端要加A
2.你的载体与片段的比例要计算好
5楼2014-08-18 15:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 269求调剂 +10 啊啊我我 2026-04-07 10/500 2026-04-10 10:38 by 高维春
[考研] 22408 352分求调剂0854类 +3 努力的夏末 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:12 by 314126402
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +11 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 11/550 2026-04-10 09:37 by 690616278
[考研] 289求调剂 +4 L1ttleTiger 2026-04-04 4/200 2026-04-09 19:53 by xiayizhi
[考研] 电子信息270求调剂 +11 terminal469 2026-04-07 11/550 2026-04-09 18:28 by hy861222
[考研] 327求调剂 +12 Xxjc1107. 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:46 by luoyongfeng
[考研] 22408 266求调剂 +11 masss11222 2026-04-07 14/700 2026-04-08 11:06 by yulian1987
[考研] 265求调剂 +19 小木虫085600 2026-04-06 21/1050 2026-04-08 10:38 by 逆水乘风
[考研] 336材料与化工085600求调剂 +19 水星记infp 2026-04-05 22/1100 2026-04-07 21:11 by yongzhesheng
[考研] 材料求调剂 +18 一样YWY 2026-04-05 18/900 2026-04-07 15:49 by dxlg
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 考研调剂生寻找导师 +3 顾瞻考研啊 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:18 by 啵啵啵0119
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +6 cs0106 2026-04-03 6/300 2026-04-04 11:20 by w_xuqing
[考研] 278求调剂 +6 Yy7400 2026-04-03 6/300 2026-04-04 09:53 by zhangdingwa
信息提示
请填处理意见