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qauzgd

铁虫 (初入文坛)

[求助] T载体连接问题 已有2人参与

大家好,我的目的片段1600多点,PCR出来后要做测序然后农杆菌转化植株的。
PCR的产物长度正常,连PMD-18T载体,转DH5α,蓝白斑(有蓝白斑但是很稀)。
然后就出问题了,摇起来的菌液用上述的引物PCR,要么没东西要么2000+的产物,2000+的菌液去生工测序,回了俩片段都是载体序列。

求问是哪里出问题啊,连T载体做了快一个月了,一直这样。。实在不行我就拿PCR产物去生工测了。。。谢谢大家!

补上句,其他人用同样地酶和载体.菌,连T载体,一次就连上了。。。
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owl2010

金虫 (正式写手)

★ ★
qauzgd(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:34:37
目测T载体自连,T载体2000多bp,片段1600,算是大片段了,几百bp连T很容易连进去的,应该好好按摩尔比算一下。 另外你可以用M13引物去P一下2000多的菌液,顺便做个水对照看一下。
男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
2楼2014-08-17 18:39:26
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