24小时热门版块排行榜    

查看: 2367  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qauzgd

铁虫 (初入文坛)

[求助] T载体连接问题 已有2人参与

大家好,我的目的片段1600多点,PCR出来后要做测序然后农杆菌转化植株的。
PCR的产物长度正常,连PMD-18T载体,转DH5α,蓝白斑(有蓝白斑但是很稀)。
然后就出问题了,摇起来的菌液用上述的引物PCR,要么没东西要么2000+的产物,2000+的菌液去生工测序,回了俩片段都是载体序列。

求问是哪里出问题啊,连T载体做了快一个月了,一直这样。。实在不行我就拿PCR产物去生工测了。。。谢谢大家!

补上句,其他人用同样地酶和载体.菌,连T载体,一次就连上了。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR产物纯化后有没有加A尾巴?没有加的话很难连接上去的……
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
3楼2014-08-17 19:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

owl2010

金虫 (正式写手)

★ ★
qauzgd(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:34:37
目测T载体自连,T载体2000多bp,片段1600,算是大片段了,几百bp连T很容易连进去的,应该好好按摩尔比算一下。 另外你可以用M13引物去P一下2000多的菌液,顺便做个水对照看一下。
男人的组成要素:金钱、面子、性、怕死、自恋、吹牛逼。
2楼2014-08-17 18:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

考拉003

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangranjun at 2014-08-17 19:05:20
PCR产物纯化后有没有加A尾巴?没有加的话很难连接上去的……

一般rtaqPCR都会自动加A的。这位仁兄的问题就是载体自连了吧。。。。。换个载体试试,我们用的pGEM--T载体,还好
不是微生物专业的却进入微生物行业
4楼2014-08-17 19:41:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qauzgd: 金币+3 2014-09-13 19:44:44
1.末端要加A
2.你的载体与片段的比例要计算好
5楼2014-08-18 15:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +3 solanXXX 2026-03-20 3/150 2026-03-20 16:41 by fxue1114
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 10/500 2026-03-20 15:58 by 蔡诚
[考研] 281求调剂(0805) +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +4 Charlieyq 2026-03-19 4/200 2026-03-20 14:26 by 无懈可击111
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 288求调剂 +15 于海海海海 2026-03-19 15/750 2026-03-19 22:41 by 学员8dgXkO
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +5 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 6/300 2026-03-18 17:53 by 无际的草原
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[考研] 一志愿西南交大,求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
信息提示
请填处理意见