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qauzgd

铁虫 (初入文坛)

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专业: 基因表达调控与表观遗传学

[求助] T载体连接问题已有2人参与

大家好，我的目的片段1600多点，PCR出来后要做测序然后农杆菌转化植株的。
PCR的产物长度正常，连PMD-18T载体，转DH5α，蓝白斑（有蓝白斑但是很稀）。
然后就出问题了，摇起来的菌液用上述的引物PCR，要么没东西要么2000+的产物，2000+的菌液去生工测序，回了俩片段都是载体序列。

求问是哪里出问题啊，连T载体做了快一个月了，一直这样。。实在不行我就拿PCR产物去生工测了。。。谢谢大家！

补上句，其他人用同样地酶和载体.菌，连T载体，一次就连上了。。。

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1楼 2014-08-17 17:17:17

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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

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管辖: 文学芳草园

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

PCR产物纯化后有没有加A尾巴？没有加的话很难连接上去的……

他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！

3楼2014-08-17 19:05:20

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