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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 设计的引物有问题吗？
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l狂人

金虫 (正式写手)

[求助] 设计的引物有问题吗？ 已有2人参与

跑出来的条带不是目的条带，目的条带2000bp左右，跑出来两条不到1000bp的，用来做探针的，有影响吗？还有一对引物目标1000多bp,跑出来有2000多bp,测序时两个反应双向测通，出来有一段与目的基因同源性很高，另一段没有同源性，用来做探针可以吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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方法总比困难多
1楼 2014-08-07 17:12:34
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先，你应该告诉我们这个探针用来做什么试验的？
另外，特异性太差了，这个引物不太合适，不过你也可以考虑调节下跑的环境，看看能否有效，但你只跑出1000的没跑出2000的，应该是无效的，建议重新设计。
第三，1000多的跑出2000多，中间有目标序列和未知序列，这个很正常的，不过还是不合适做探针，

建议如果你不好设计的话，不妨试试三个引物的那种探针（叫什么忘了），就是除了头尾，中间片段也有个引物匹配，这个精确度高点。按需选择吧
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3楼2014-08-13 09:37:04
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
l狂人(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-08 09:35:31
做探针的条件是一定要与目标基因结合 那你要看你的引物与目的基因到底结合了没啊
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2楼2014-08-08 09:07:31
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