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l狂人

金虫 (正式写手)

[求助] 设计的引物有问题吗? 已有2人参与

跑出来的条带不是目的条带,目的条带2000bp左右,跑出来两条不到1000bp的,用来做探针的,有影响吗?还有一对引物目标1000多bp,跑出来有2000多bp,测序时两个反应双向测通,出来有一段与目的基因同源性很高,另一段没有同源性,用来做探针可以吗

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方法总比困难多
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
l狂人(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-08 09:35:31
做探针的条件是一定要与目标基因结合 那你要看你的引物与目的基因到底结合了没啊
2楼2014-08-08 09:07:31
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bwangel

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先,你应该告诉我们这个探针用来做什么试验的?
另外,特异性太差了,这个引物不太合适,不过你也可以考虑调节下跑的环境,看看能否有效,但你只跑出1000的没跑出2000的,应该是无效的,建议重新设计。
第三,1000多的跑出2000多,中间有目标序列和未知序列,这个很正常的,不过还是不合适做探针,

建议如果你不好设计的话,不妨试试三个引物的那种探针(叫什么忘了),就是除了头尾,中间片段也有个引物匹配,这个精确度高点。按需选择吧
3楼2014-08-13 09:37:04
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