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肖thest

木虫 (小有名气)

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[求助] 求助引物设计：前前后后三次都有问题，请大神帮帮忙…………感激不尽已有2人参与

共1067bp，粗线是我需要看的基因区域，想设计一对引物，普通PCR后测序（单向测，所以上游或者下游引物离目标区域起码60bp），用primer或者NCBI primer blast设计了三次，每次引物特异性较差或者退火温度摸不出来。
下面是我的序列：
TGAGACTTTT CCGTTGCCGC TGGGAGCCGG AGGCGCGGGG ACCTCTTGGC GCGACGCTGC
CCCGCGAGGA GGCAGGACTT GGGGACCCCA GACCGCCTCC CTTTGCCGCC GGGGACGCTT
GCTCCCTCCC TGCCCCCTAC ACGGCGTCCC TCAGGCGCCC CCATTCCGGA CCAGCCCTCG
GGAGTCGCCG ACCCGGCCTC CCGCAAAGAC TTTTCCCCAG ACCTCGGGCG CACCCCCTGC
ACGCCGCCTT CATCCCCGGC CTGTCTCCTG AGCCCCCGCG CATCCTAGAC CCTTTCTCCT
CCAGGAGACG GATCTCTCTC CGACCTGCCA CAGATCCCCT ATTCAAGACC ACCCACCTTC
TGGTACCAGA TCGCGCCCAT CTAGGTTATT TCCGTGGGAT ACTGAGACAC CCCCGGTCCA
AGCCTCCCCT CCACCACTGC GCCCTTCTCC CTGAGGACCT CAGCTTTCCC TCGAGGCCCT
CCTACCTTTT GCCGGGAGAC CCCCAGCCCC TGCAGGGGCG GGGCCTCCCC ACCACACCAG
CCCTGTTCGC GCTCTCGGCA GTGCCGGGGG GCGCCGCCTC CCCCATGCCG CCCTCCGGgc
tgcggctgct gcCgctgctgcta ccgctgctgt ggctactggt gctgACGCCT GGCCGGCCGG CCGCGGGACT
ATCCACCTGC AAGACTATCG ACATGGAGCT GGTGAAGCGG AAGCGCATCG AGGCCATCCG
CGGCCAGATC CTGTCCAAGC TGCGGCTCGC CAGCCCCCCG AGCCAGGGGG AGGTGCCGCC
CGGCCCGCTG CCCGAGGCCG TGCTCGCCCT GTACAACAGC ACCCGCGACC GGGTGGCCGG
GGAGAGTGCA GAACCGGAGC CCGAGCCTGA GGCCGACTAC TACGCCAAGG AGGTCACCCG
CGTGCTAATG GTGGAAACCC ACAACGGTGA GCTCGGAGGG GCAGGGGAGC CGGGAGGGGG
GCCCCCAGGG GGCGCCGGAG TGCCGGGGCC ACGGGTAGGA AGTGACTGGC AGAAGAAACT
GGCTGGAGGA AGAGGACACC CCGGGGCAAA GGGA

[ Last edited by 肖thest on 2013-12-22 at 13:43 ]

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有谁知道四环素目的基因小于200bp的引物？或者谁能指导下怎么设计？不胜感激！已经有3人回复
【求助/交流】求助引物设计步骤已经有3人回复

thest

1楼 2013-12-22 13:42:26

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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Dr.G

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

PCR仪可以梯度的话，建议梯度PCR试一下，试试能不能扩出你要的条带

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28楼2013-12-22 23:58:07

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woshishui916

木虫 (著名写手)

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专业: 植物遗传学

【答案】应助回帖

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肖thest: 金币+15, ★★★★★最佳答案, 很感激，很nice的人 2013-12-22 23:13:55
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 20:45:26

上游：AAGCCTCCCCTCCACCACTG
下游：CCGCAGCTTGGACAGGATCT
肯定能出来
出不来你再联系我

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